Лагерь поколение: Детский ребячий лагерь «Новое поколение» в Перми

Содержание

Онлайн бронирование путевок в лагерь «Новое поколение» в Перми

Услуги, входящие в стоимость путевки

Стандарт

Палаточный лагерь

Услуги проживания:
Благоустроенный корпус: комнаты 6 -8 человек, кровати двух или одноярусные, встроенный шкаф для одежды, полочки у кровати

Услуги питания:
5-ти разовое питание (завтрак, обед, полдник, ужин, 2-ой ужин).

Медицинские услуги:
оказание первой медицинской помощи при получении травмы, падениях, отравлениях, ожогах,простудных заболеваниях и тд.). Физиопроцедуры ( по показаниям)

Бытовые услуги:
санузел, умывальная комната, душевые на этаже, баня, душевые на территории (по часам работы)

Услуги досугово-образовательной программы:
согласно программе смены: Работа в отряде по выбранному профилю. Организация и проведение межотрядных и общелагерных дел различной направленности — творческие концерты, конкурсно – игровые и развлекательные программы, спортивные акции, турниры (более 10 видов спорта) и соревнования; игры разных моделей (стратегические, ситуативные, туристические и т.д.) Дискотеки, кинопросмотры. Работа психолога – отрядная и индивидуальная

Услуги занятия спортом и физкультурой:
Открытые и закрытые спортивные площадки (футбол, баскетбол, волейбол, флорбол и д.р.). Открытый бассейн, веревочный парк и скалодром – по возрасту, тренажерный зал, настольный теннис, ролики, велосипеды, самокаты, катамараны, пейнтбол, арбалеты, различный спортивный инвентарь. Организация походов и проведение походов.

Услуги дополнительного образования:
прикладное творчество, мягкая игрушка, изо-студия, библиотека, медиацентр, студия визуальных эффектов, занятия в вокальной, танцевальной, инструментальной студиях. Занятия в клубах по интересам: лидерская, театральная, интеллектуальная, игровая, спортивная, психологическая и многие другие.

Услуги страхование:
договор коллективного страхования от несчастных случаев

Охранные услуги:
круглосуточная охрана

Услуги сохранности личных вещей:
камера хранения для ценных вещей на каждый отряд

Услуги трансфера:
нет

Услуги экипировки:
палатки и спальники на время похода, театральные, сценические костюмы

Услуги интернета и связи:
стационарный телефон, платный интернет (карты приобретаются в детском магазине), бесплатный интернет (в медиа-центре по часам работы, фойе в главном корпусе)

Услуги проживания:
палатки 8-10 человек, кровати

Услуги питания:
5-ти разовое питание (завтрак, обед, полдник, ужин, 2-ой ужин).

Медицинские услуги:
оказание первой медицинской помощи при получении травмы, падениях, отравлениях, ожогах,простудных заболеваниях и тд.). Физиопроцедуры ( по показаниям)

Бытовые услуги:
санузел, умывальник в здании главного корпуса, душевые на территории (по часам работы) баня

Услуги досугово-образовательной программы:
согласно программе смены Работа в отряде по выбранному профилю. Организация и проведение межотрядных и общелагерных дел различной направленности — творческие концерты, конкурсно – игровые и развлекательные программы, спортивные акции, турниры (более 10 видов спорта) и соревнования; игры разных моделей (стратегические, ситуативные, туристические и т.д.) Дискотеки, кинопросмотры. Работа психолога – отрядная и индивидуальная

Услуги занятия спортом и физкультурой:
Открытые и закрытые спортивные площадки (футбол, баскетбол, волейбол, флорбол и д.р.). Открытый бассейн, веревочный парк и скалодром – по возрасту, тренажерный зал, настольный теннис, ролики, велосипеды, самокаты, катамараны, пейнтбол, арбалеты, различный спортивный инвентарь. Организация походов и проведение походов.

Услуги дополнительного образования:
прикладное творчество, мягкая игрушка, изо-студия, библиотека, медиацентр, студия визуальных эффектов, занятия в вокальной, танцевальной, инструментальной студиях. Занятия в клубах по интересам: лидерская, театральная, интеллектуальная, игровая, спортивная, психологическая и многие другие.

Услуги страхование:
договор коллективного страхования от несчастных случаев

Охранные услуги:
круглосуточная охрана

Услуги сохранности личных вещей:
камера хранения для ценных вещей на каждый отряд

Услуги трансфера:
Есть (от общего места сбора до лагеря в день заезда и обратно в день выезда)

Услуги экипировки:
Фирменные футболки с логотипом лагеря, галстуки с символикой лагеря.

Услуги интернета и связи:

стационарный телефон, платный интернет (карты приобретаются в детском магазине), бесплатный интернет (в медиа-центре по часам работы, фойе в главном корпусе)

Услуги проживания:
Не благоустроенный корпус — деревянный, не отапливаемый, комнаты 8 человек, кровати двух ярусные, комод

Услуги питания:
3-х разовое питание (завтрак, обед, полдник).

Медицинские услуги:
оказание первой медицинской помощи при получении травмы, падениях, отравлениях, ожогах,простудных заболеваниях и тд.). Физиопроцедуры ( по показаниям)

Бытовые услуги:
санузел, умывальник — отдельное здание возле корпуса, душевые на территории (по часам работы) баня

Услуги досугово-образовательной программы:
согласно программе смены Работа в отряде по выбранному профилю. Организация и проведение межотрядных и общелагерных дел различной направленности — творческие концерты, конкурсно – игровые и развлекательные программы, спортивные акции, турниры (более 10 видов спорта) и соревнования; игры разных моделей (стратегические, ситуативные, туристические и т.д.) Дискотеки, кинопросмотры. Работа психолога – отрядная и индивидуальная

Услуги занятия спортом и физкультурой:

Открытые и закрытые спортивные площадки (футбол, баскетбол, волейбол, флорбол и д.р.). Открытый бассейн, веревочный парк и скалодром – по возрасту, тренажерный зал, настольный теннис, ролики, велосипеды, самокаты, катамараны, пейнтбол, арбалеты, различный спортивный инвентарь. Организация походов и проведение походов.

Услуги дополнительного образования:
прикладное творчество, мягкая игрушка, изо-студия, библиотека, медиацентр, студия визуальных эффектов, занятия в вокальной, танцевальной, инструментальной студиях. Занятия в клубах по интересам: лидерская, театральная, интеллектуальная, игровая, спортивная, психологическая и многие другие.

Услуги страхование:
договор коллективного страхования от несчастных случаев

Охранные услуги:
круглосуточная охрана

Услуги сохранности личных вещей:
камера хранения для ценных вещей на каждый отряд

Услуги трансфера:
От общего места сбора до лагеря и обратно каждый день в сроки смены

Услуги экипировки:
Фирменные футболки с логотипом лагеря, галстуки с символикой лагеря

Услуги интернета и связи:
стационарный телефон, платный интернет (карты приобретаются в детском магазине), бесплатный интернет ( в медиа-центре по часам работы, фойе в главном корпусе)


Медицинские услуги:
оказание первой медицинской помощи при получении травмы, падениях, отравлениях, ожогах,простудных заболеваниях и тд.). Физиопроцедуры ( по показаниям)

Читать дальше

«Поколение Z» – Городской лагерь в Москве

Программа

«Новогодние приключения »- программа, направленная на формирование и развитие у детей творческого потенциала, коммуникативных качеств личности, развивающая организационные способности у детей.
Дети учатся работать в коллективе, развивают творческие навыки, а также учатся работе с различными техниками и материалами декоративно прикладного искусства.

На этой смене детей ждут настоящие новогодние приключения:

  • Дети познакомятся ближе с новогодними и рождественскими традициями;
  • Различные мастер-классы и воркшопы помогут развить у детей художественный вкус, творческое воображение, пространственное мышление, сенсорику, мелкую моторику и гибкость рук;
  • Дети научатся приемам оформления и украшения интерьера;
  • Тематические игры, новогодние квесты не дадут им заскучать;
  • Веселое катание на роликах и тюбингах;
  • Увлекательная выездная экскурсия.

Ждем вас на нашей волшебной новогодней смене.

Обучение

Интенсивный курс посвящён:
  • развитию уверенности в себе
  • тренировки техники речи
  • работе с голосом и интонацией.

Расположение

Адрес: Москва, Кастанаевская д.9,к.1, открыть карту

Место сбора в образовательном центре. Прогулки на детских площадках ближайших школ, в парке Фили и один выезд на экскурсию.

Питание

Второй завтрак, обед и полдник. Питание привозное и полностью соответствует стандартам питания для детей.

Безопасность и медицина

Мы полностью несем ответственность за ваших детей, они никогда не остаются без нашего присмотра. Ежедневно заполняем листы здоровья.

Об организации

Год основания:
2019 г.;
Взрослых на отряд:
2;
Детей в отряде:
8;
Детей на смене:
15;

Информация с официального сайта лагеря «Поколение Z»

О сотрудниках

Все вожатые с педагогическим образованием.

Отзывы о лагере «Поколение Z»

  • Подтвержденный отзыв о лагере «Поколение Z»

    Что понравилось: Отличный лагерь, сыну понравилось. Много прогулок, различных занятий. Обязательно придем еще. Что не понравилось: Ребенок расстроился, что не было обещанного квеста, из-за плохого поведения некоторых детей. О вожатых и персонале: Внимательные, вежливые. О размещении: Все хорошо. О питании: Сын в лагере обычно ничего не ест, а тут что-то ел и сказал что всегда были фрукты. О программе: Ребенку было некогда позвонить, всегда был занят:)

    Екатерина, мама ребенка 9 лет
    28 Марта 2022
  • Отзыв о лагере «Поколение Z»

    Квалифицированный персонал, хорошие учителя, в самом центре чисто, есть общественная кухня. Приемлемая цена, удачное расположение. Сам центр чистый, все аккуратно. Большой выбор курсов. Бесплатные пробные занятия. Много классов. Для детей есть собственная валюта которая даётся за занятия и которую можно потратить на подарки в этом центре.

    Никита, папа
    14 Октября 2019
  • Отзыв о лагере «Поколение Z»

    Ребенок 6 лет посетил в июне одну смену детского лагеря по программе: английский язык Интенсив. Эмоций было море,все очень понравилось! Ребенок убегал в лагерь вприпрыжку и с хорошим настроением. Интересная задумка: во время занятий дети зарабатывают звезда,потом их можно обменять на местную валюту и потратить там же в Центре, что он и сделал!

    Наталья, мама ребенка 6 лет
    24 Августа 2019
  • Отзыв о лагере «Поколение Z»

    Хорошая презентация центра. Оба моих ребенка прошли тестирование, определились с направлением развития способностей. Если педагоги будут работать в соответствии с обещанной программой, ждём отличных результатов от детей, поживём-увидим. Интересные и многообещающие занятие для ребят. Персонал очень дружелюбный, причём искренне доброжелательно относятся к детям, с вниманием к родителям, отвечают на все вопросы. Записала сына в летний лагерь, дочь на Key to Learning. Поделюсь впечатлениями по факту начала занятий. Пока, всё понравилось! Единственное Но, что-то с вентиляцией в помещении, при закрытых дверях (но открыты окна) в игровой душновато…

    Родитель, родитель
    26 Мая 2019
  • Отзыв о лагере «Поколение Z»

    Наш сын Артём, ему 13 лет, посещал занятия по робототехнике. Ему очень понравилось. Каждую неделю Артём ждал субботу, чтобы поскорее пойти туда. Очень порадовало то, что группы были маленькими. И преподаватель Анастасия уделяла каждому ребенку внимание и помогала разобраться с заданием. В конце апреля Анастасия предложила Артёму участвовать в Олимпиаде по робототехнике. Это был первый такой опыт сына. Были разные эмоции: от огорчения до радости. Он понял, что есть над чем работать и к чему стремиться. Сейчас мы уезжаем в другой город. Артём сожалеет о том, что не сможет посещать свои любимые занятия.

    Боталова Юлия, мама ребенка 13 лет
    18 Мая 2019
  • Отзыв о лагере «Поколение Z»

    Вот уже два месяца ребенок посещает здесь курсы программирования. Хочу оставить отзыв о работе этого центра, впечатление уже сложилось. Впечатление хорошее. Из больших плюсов хочу отметить, что центр имеет соответствующую лицензию, во время собеседования дают информацию о преподавателях — специалисты с высоким уровнем квалификации. Центр работает по нескольким направлениям, и гуманитарии, и дети, склонные к точным наукам могут выбрать подходящую группу. Даже есть группа актерского мастерства. Мы пошли на программирование. И не только потому, что ребенку это интересно, что не говори, но без интернета сейчас никуда. Хотелось бы, чтобы сын не только пользователем был, а имел навыки грамотной работы. Сын посещает с удовольствие, нравится преподаватель, методы изложения материала, контакт с детьми. На мой взгляд очень полезное учреждение.

    Татьяна, мама
    12 Марта 2019
  • Отзыв о лагере «Поколение Z»

    Мы стали недавно посещать этот центр, да он собственно и открылся совсем недавно, так что мы из числа первых учеников. Центр скорее относится к развивающим, группы создаются по разным направлениям: ментальная арифметика, скорочтение, робототехника, программирование, бизнес навыки, эмоциональный интеллект, шахматы, блоггинг, английский язык, ранее развитие детей. Если есть сомнения что ребенку будет более интересным — определиться с выбором помогает психолог (причем совершенно бесплатно, еще и рассказывают на что обратить внимание для развития способностей ребенка).
    Ближе всего нам оказалось театральное мастерство (кто бы мог подумать). Я теперь понимаю почему дочь с самого детства пыталась подражать всем, кто ей нравился (хоть знакомые, хоть киногерои), оказывается это не гримасничество, а талант проклевывался) Очень здорово, что мы нашли этот центр, теперь уже обучать ее будут профессионально. Преподаватели сильнейшие, во время собеседования поняла, что многие с регалиями. Мамочки, если хотите развивать таланты и способности своих деток, а может и наоборот, привить какие-то навыки, то посещение этого центра рекомендую, для детей и интерес, и польза.

    Аноним, родитель
    5 Марта 2019

Что включено в стоимость

  • Пребывание ребенка в центре по выбранной программе.
  • Второй завтрак с 11:00 до 12:00
  • Обед (только для супер интенсив) с 14:00 до 15:00
  • Одна экскурсия (только для супер интенсив) театр, музей или квест.
  • Полдник (только для супер интенсив) с 17:30 до 18:00

Стоимость и смены

На текущий момент мы не располагаем информацией о сменах данного лагеря. Подпишитесь на обновление информации, и мы сообщим вам о появлении выгодных предложений на этот лагерь.

7 смена лагерь «Комсомольский»

Образовательная программа
«ПОКОЛЕНИЕ БУДУЩЕГО»

Организаторы: детский лагерь «Комсомольский» в партнерстве с 7-й гвардейской десантно-штурмовой (горной) Краснознамённой, орденов Суворова и Кутузова дивизией.

Категория участников: подростки 11-16 лет, победители олимпиад по географии, истории, экологии, биологии, победители федеральных и региональных конкурсов по туризму и краеведению, художественному (хореографическому) и прикладному творчеству, спортивных состязаний, активисты детских и молодёжных общественных, экологических, морских, военно-патриотических организаций, объединений и клубов.

Содержание программы

Программа направлена на развитие подростков в сферах туризма, спорта, экологии, хореографии, прикладного творчества, военно-патриотической деятельности, а также на их знакомство с культурно-историческим наследием детского лагеря «Комсомольский».

Фестиваль культуры и искусств, посвящённый Году народного искусства и культурного наследия, позволит подросткам проявить себя в роли организатора или участника в 5 направлениях деятельности: изобразительном, физкультурно-оздоровительном, театральном, вокально-хоровом и танцевальном, а также позволит реализовать свои творческие способности в различных пространствах Фестиваля и в конкурсной программе «Перезагрузка».

Участники смены не только пройдут образовательные курсы по предложенным направлениям, но и получат возможность развить коммуникативные, лидерские и творческие навыки, участвуя в создании «Событийной карты Фестиваля», где в команде смогут разработать дела, организаторами которых станут инициативные группы.

Подростки примут участие в Фестивальном интерактиве, где смогут организовать мастер-классы по анимации, национальным играм, викторинам и конкурсам, посвященным культурному наследию народов России.

Каждый участник смены получит опыт коллективного и индивидуального создания экологических флешмобов и акций в рамках ЭКО-Феста, а также расширит свои знания и представления об истории народного искусства и культурного наследия в ходе познавательной квиз-игры «Культурный код России».

По итогам смены организаторы мастер-классов, активные участники конкурсной программы будут награждены грамотами и дипломами.

Контактное лицо по вопросам содержания программы:

Базук Александр Викторович, начальник детского лагеря «Комсомольский», тел: +7 86167 91-268, e-mail: [email protected]

Участнику программы необходимо ознакомиться с образовательным навигатором, распечатать первую страницу, подписать и привезти навигатор в «Орлёнок».

создаём молодёжный IT-кластер будущего в лагере IThub camp

 

Этим летом начнётся второй сезон профориентационного лагеря IThub camp. Здесь формируется новое поколение айтишников! У современных подростков амбиций хватит на целый IT-кластер. Именно поэтому тема этого сезона — «Как сделать мир лучше с помощью информационных технологий». Смело? А мы не боимся больших целей. Лагерь может стать отправной точкой для тех, кто создаст новый устойчивый мир. Верим, что так и будет, а пока — добро пожаловать в IThub camp! Рассказываем, как устроен лагерь.

Что такое IThub camp

IThub camp — это летний городской лагерь. В чём его особенности?

Профориентация. Помогаем выбрать профессию в IT.
Тест-драйв студенческой жизни. Специально для тех, кто собирается поступать в колледж: станьте на 10 дней хабсом и решите, подходит ли вам наша методика обучения.
Творческая атмосфера. В 2022 году тема лагеря — «Как сделать мир лучше с помощью информационных технологий». Прокачаем лидерские и визионерские качества!

Идёт занятие по цифровому дизайну

Лагерь: первый сезон

В прошлом году ровно 100 ребят провели лето-2021 с пользой вместе с IThub! Не верим в магию чисел, но это правда круто: 100 участников и 100% успех! Школьники занимались в видеошколе, снимали фильмы, знакомились с IT-дисциплинами на мастер-классах.

Очень запомнились занятия с психологом Виталием Телегиным и мастер-классы. Было очень классно делать видео вместе с ребятами, да и, в целом, пообщаться и познакомиться с атмосферой колледжа было круто!!! Я принял решение поступать в колледж раньше, но были сомнения. Поэтому я записался в лагерь и убедился в своём решении.

Алексей Скуратов, студент 1-го курса специальности «Программирование» IThub college

Лагерь: второй сезон

В этом году новая программа. Вместо видеошколы участники будут заниматься проектами по решению глобальных проблем человечества. Но это далеко не всё, что ожидает ребят! Программа очень насыщенная.

Утро для физической активности и командообразования, день — для профориентационных занятий по IT-дисциплинам и анимационной программы, вечер — для проектирования и рефлексии. Каждый день вожатые проводят игры, развивающие soft skills: работу в команде, внимательность, коммуникативные навыки. Большое внимание уделяется и физической активности. Всё время сидеть в помещении — не наш вариант.

Программа лагеря довольно интенсивная. Мы успеем многое: познакомить участников с IT-профессиями через проектное обучение, прокачать soft skills, погрузиться в решение глобальных проблем человечества (в связке с IT) и, конечно, же отдохнуть! Мы планируем несколько экскурсий по ВДНХ. 

Станислав Краснов, руководитель проекта «IThub camp»

Занятия физкультурой при хорошей погоде проводились на улице!

Профориентационные занятия

В лагере реализована полноценная педагого-психологическая программа по профориентации. Мы используем комплексный подход: совмещаем коучинг профориентационного психолога и проектную деятельность. Сначала определяемся с тем, к чему лежит душа, проверяем гипотезы на практике и делаем выводы через рефлексию. Итог — дорожная карта действий по освоению IT-профессии.

Занятия по профориентации проводят студенты колледжа, прошедшие специальную подготовку в Школе Актива. Они знают 1001 способ объединить незнакомых людей в игровой форме. Студенты старших курсов — без 5 минут IT-специалисты. Многие из них работают по специальности и даже преподают. Так что подростки погружаются в профессиональную среду, но в то же время общаются с почти сверстниками, на пару-тройку лет старше их. Всем комфортно!

IT-профессии, которые можно попробовать в лагере
✔ Программист
✔ Веб-дизайнер
✔ Веб-разработчик
✔ Разработчик игр
✔ Цифровой художник
✔ Продуктовый дизайнер
✔ Этичный хакер
✔ Специалист по кибербезопасности
✔ Интернет-маркетолог
✔ SMM-менеджер
✔ Контент-мейкер

Каждый день проходили занятия по программированию, веб-разработке, разработке игр, веб-дизайну и др.

Здесь рождаются инновации

Лагерь размещается в уникальном месте — в корпусах инновационно-образовательного комплекса «Техноград». Это центр, где обучаются современным профессиям. И всё это на территории ВДНХ, где уже много лет сосредоточены лучшие достижения страны — в том числе и технологические.

Вы попадёте в просторные здания с панорамными окнами, где есть всё для продуктивной работы: современные компьютерные классы, аудитории для проектной работы, спортивное оборудование.

В этих же корпусах учатся и студенты колледжа

Партнёры лагеря

Мы благодарим партнёров лагеря. Без вас не получилось бы создать такую яркую и интенсивную программу лагеря, полную открытий и погружения в цифровые профессии будущего! Инновационно-образовательный комплекс «Техноград» предоставил для нас своё уютное и технологичное пространство, где ребята могут пробовать себя в разных профессиях. Вместе со специалистами дома комиксов «TAKAPULTA» участники погрузятся в профессию цифрового художника. К началу сезона партнёров станет больше — как и возможностей для каждого участника!

Лето близко: самое время оплатить лагерь со скидкой

Сейчас самое время записываться — ближе к лету места могут закончиться.

Записаться в лагерь

*Возможны изменения, актуальную информацию смотрите на https://camp.ithub.ru

III Всероссийский патриотический межнациональный лагерь молодежи «Поколение»

03 дек. 2019 г., 11:59

Авторов лучших короткометражных фильмов на межнациональную тематику наградили 21 октября в историческом центре Москвы. В особняке на Волхонке состоялась церемония закрытия III Всероссийского патриотического межнационального лагеря молодежи «Поколение», организованного Федеральным агентством по делам национальностей.
Более 170 лидеров молодежи из 52 регионов России под руководством опытных наставников – режиссеров и актеров придумали и сняли восемь короткометражек, пять из них получили награды и будут рекомендованы ФАДН России к показу на региональных телеканалах.
Гран-при получили сразу два фильма – #человек и «Не прыгай!», первое место жюри присудило короткометражке «193», второе – «Кумек habe», третье – «Письмо», приз зрительских симпатий достался ролику #Человек.

 

Источник: http://inklincity.ru/novosti/kultura/iii-vserossiyskiy-patrioticheskiy-mezhnacionalnyy-lager-molodezhi-pokolenie

Поколение свободы » Летний лидерский лагерь “Поколение Свободы”

Уникальная программа с 24 июля по 14 августа 2021 г.

Приглашаем детей 10-16 лет в летнее приключение в компании друзей!

Мы отправляемся к побережью Черного моря плюс авторская развивающая программа, когда дети счастливы от процесса обучения и вырабатывают полезные привычки!

Программа летнего лагеря рассчитана для того, чтобы в атмосфере СВОБОДЫ и ДОВЕРИЯ дети открыли таланты, проявили сильные стороны личности и расширили кругозор.

Кто организатор лагеря?

Мы – создатели нового образовательного проекта для детей от 2,5 до 16 лет в г. Днепр.

Наша жизнь – это счастливые дети!

За нашими плечами 7-летний опыт в организации и проведении детских лагерей.

В программе лагеря участвуют эксперты в области тренингового развития и воспитания.

Почему стоит отправить ребенка в летний лидерский лагерь «Поколение Свободы»?

Наш подход основан на допущении, что дети уникальны в талантах и способностях настолько, что трудно даже представить.

Им нужны такие навыки, которые не дает стандартное образование.

Цель летней программы — научить подростков эффективной коммуникации, погрузить в культурно-образовательную среду и главное – открыть у детей новые таланты!


 

Что по итогу получит ребенок в лагере?

  • Приобретет уверенность в себе, поверит в свои силы;
  • Научится взаимодействовать в команде;
  • Научится уважать себя и других;
  • Научится самостоятельности и ответственности;
  • Научится легко общаться и дружить;
  • Расширит кругозор, а значит и поле своих возможностей;
  • Узнает, как получить вдохновение для учебы;
  • Освоит способы достижения целей;
  • Получит рекомендации по направлению развития талантов;
  • В течение смены выработает привычку постоянного совершенствования себя и освоит навык созидать.

Что мы гарантируем?

  • программа лагеря универсальна для детей с разными способностями;
  • наша команда заинтересует даже «не заинтересованных»;
  • тьютеры, которые станут для детей друзьями;
  • разностороннее развитие детей;
  • безопасность: круглосуточное медицинское сопровождение и охраняемая территория;
  • комфорт: уютные комнаты и полезное сбалансированное питание.

 

Программа и преподаватели

В чем особенность и главные достоинства программы лидерского лагеря?

Итак, по порядку:

1. В лагере дети будут создавать счастливое общество, проводить взрослые выборы, создавать собственную идею государства и выбирать основные ПАРАМЕТРЫ СЧАСТЬЯ в собственном обществе.

2. В образовательной программе лагеря принимают участия известные мастера своего дела, заполучить каждого из которых – великая удача:

  • Колтунович Елена – автор и ведущая программы: (г. ДНЕПР), психолог, бизнес-тренер, тьютор, руководитель школы проектного обучения «Полет».
  • Филоненко Александр – исследователь и докладчик европейских университетов. Преподаватель Института семейной психологии и консультирования, доктор философских наук, доцент Харьковского национального университета им. В.Н. Каразина, преподаватель Института религиозных наук св. Томы Аквинского в Киеве. Философ, физик и богослов, общественный лектор, общественный деятель, инициатор проектов ОАО «Эммаус», центр европейской культуры «Данте» и адаптации «La casa volante» (Харьков).

  • Кулинич Галина – психолог, педагог, исследователь искусства, автор и ведущая интерактивных проектов «История Древних цивилизаций» и «Смотри, шедевр!».

3. Занятия, совмещенные со здоровым режимом дня, включают в себя следующие направления:
• Построение модели ИДЕАЛЬНОГО ОБЩЕСТВА;
• История цивилизаций – ГРЕЧЕСКАЯ МИФОЛОГИЯ;
• История КРАСОТЫ;
• УВЛЕКАТЕЛЬНАЯ АНАТОМИЯ;
• ВОЛШЕБНАЯ НАУКА;
• ЖУРНАЛИСТИКА;
• ПИСАТЕЛЬСКОЕ МАСТЕРСТВО;
• Практики ЛИДЕРСТВА И САМОСТОЯТЕЛЬНОСТИ;
• ОРАТОРСКОЕ МАСТЕРСТВО: преодоление страха публичных выступлений;
• РИТОРИКА;
• ТВОРЧЕСКИЕ МАСТЕР-КЛАССЫ;
• ТЕАТРАЛЬНЫЕ ПРАКТИКИ и постановка спектакля;
• СПОРТИВНЫЕ ИГРЫ И КВЕСТЫ;
• КОМАНДООБРАЗОВАНИЕ.


 

Расположение и инфраструктура:

Этим летом Летний лидерский лагерь “Поколение свободы” отправляется на Чёрное море!
Детей ждет не только авторская тренинговая программа, у которой нет аналогов, но и теплое ласковое море на побережье Скадовска!

Ухоженная и обустроенная клумбами и дорожками территория детского лагеря находится в живописном месте на самом берегу моря.

Корпус в три этажа с видом на бухту со свежим ремонтом и комфортными обустроенными удобствами на каждом этаже отдельно для мальчиков и девочек. При этом вкусное 5-ти разовое питание в современной столовой по принципу шведского стола. На территории достаточное количество многолетних деревьев и теневых беседок.

Территория базы имеет достаточный размер и хорошо обустроена. В распоряжении детей будут спортивная площадка, безопасная огороженная охраняемая территория, полянки и беседки, актовый зал для проведения занятий, площадка для дискотеки на самом берегу моря.

Так как здоровье, настроение и энергичность детей напрямую зависит от питания, поэтому лагерь со всей ответственностью подходит к этому вопросу. В ежедневном рационе детей обязательно присутствуют: свежие фрукты, соки, сбалансированные блюда и разнообразные сладости. Полноценное питание является неотъемлемой частью оздоровления и отдыха в лагере.

Запишитесь на встречу и забронируйте участие вашего подростка!

Новое поколение — лагерь в г. Пермь, Пермский край. Спортивный лагерь для детей от 6 до 16 лет

Детский лагерь «Новое поколение» расположен в Пермском крае, Пермском районе, д. Дворцовая Слудка, в одном из красивейших мест берега реки Кама, в 45 км от города Пермь.

«Новое поколение» занимает территорию 10 га, из которых 4 га – лесная зона. Береговая линия с детским пляжем протянулась на 1 км по берегу реки Кама.

Размещение/Номера: 7-8 местное
Удобства: на этаже
Питание: 5-разовое
Площадь территории: 10 Га
Инфраструктура:

концертный зал,  игровая площадка,  спортивный зал,  стадион,  футбольное поле,  баскетбольное поле,  волейбольное поле , а также а также столовая, клуб, библиотека, спортзал, бассейн, баня, спортивные площадки, футбольное поле, веревочный парк, скалодром, гимнастический комплекс, конференц зал, медицинский пункт, велосипедный парк, ролики, хоккейная коробка, летние эстрады, беседки, гамаки и многое другое.

Охрана и медобслуживание:

Оказание первой медицинской помощи при получении травмы, падениях, отравлениях, ожогах,простудных заболеваниях и т.д. Физиопроцедуры (по показаниям).
Круглосуточная охрана.

Цены, указанные на сайте kidsincamp.ru, доступны только при бронировании на этом сайте.
Бронируя путевку, вы закрепляете за собой указанную цену. Оформление и оплату путевки вы осуществляете с выбранным лагерем. Бронирование путевки бесплатно и ни к чему вас не обязывает.

Добро пожаловать в лагерь поколений | American Camp Association

Я живу в Миннесоте, где смена времен года часто драматична и зрелищна. В один день десять градусов ниже нуля, а в следующий — 65, яркое солнце и радостное пение птиц. И хотя мы все постоянно думаем о лагере, в это время года наш список дел приобретает неотложный характер. Весна для меня – это еще и время размышлений, осмысления прошлого и планирования будущего.

Этой зимой скончался мой давний директор лагеря и наставник; ей было 103 года.Она прожила удивительную жизнь и оказала огромное влияние на детей, молодежь и взрослых со всего мира. Те из нас, кто помнит ее, знают, что одним из ее лучших качеств была ее способность заставлять всех чувствовать себя желанными. В первый раз, когда я приехал в лагерь, и каждый раз после — когда я выходил из автобуса, проходил через ворота или заходил в гости — мне казалось, что она ждала меня, и теперь все было так, как должно быть. Будучи молодым вожатым лагеря, я понял, насколько важным был этот первый шаг в лагерь для тех, кто был там впервые, и для тех, кто был там в сотый раз.Я учился на ее примере и у вожатых, которые были старше меня, и у лагерного врача, который был еще старше. Когда я вспоминаю, как тепло и безопасно я чувствовал себя, когда ступил на территорию лагеря, я понимаю, что это было потому, что все вокруг меня искренне болели за меня — они все были искренне рады, что я был там.

Когда мы делаем первый шаг в лагерь, каждый из нас становится особой частью «лагеря поколений». Кэмп — отличный пример сообщества, в котором растут и процветают все поколения. Различия между бэби-бумерами, поколением X и миллениалами привлекают внимание, потому что они могут вызывать стресс, дискомфорт и разочарование, но в лагере наше многопоколенческое сообщество является источником творчества и продуктивности.

Лагерь

был моим первым шагом на пути к пониманию различий в системе взглядов, ценностях, стиле общения и других характеристиках каждого поколения и помог мне получить признание поколений.

Сообщества лагеря охватывают разнообразие поколений, ценят каждую группу за ее сильные стороны и учатся мотивировать и управлять каждой группой с изяществом и благодарностью.

Когда я впервые поехал в лагерь, я не знал, что встречу одну из самых влиятельных людей в своей жизни, когда мне будет девять, а ей — 54, или что дружба завяжется, когда я стану взрослой.Это был подарок, которым я дорожу.

Вам, как персоналу лагеря, всегда рады в лагере. Кроме того, у вас есть возможность поприветствовать отдыхающих и познакомить их с чудесами Generation Camp, который научит их тому, чего может достичь и предоставить сообщество, состоящее из представителей нескольких поколений.

 

 

границ | Путь цАМФ как терапевтическая мишень при аутоиммунных и воспалительных заболеваниях

Введение

Клетки должны быть способны воспринимать и интегрировать бесчисленные внеклеточные и внутриклеточные сигналы и адаптировать свои клеточные функции.Вторичные мессенджеры служат инициирующими компонентами каскадов передачи внутриклеточных сигналов, которые передают сигналы клеточными мессенджерами, зависящими от внеклеточных сигнальных молекул (1). Таким образом, вторичные мессенджеры значительно усиливают силу первоначального первого сигнала. Циклический аденозинмонофосфат (цАМФ) был первым обнаруженным внутриклеточным вторичным мессенджером внеклеточного лигандного действия (2). В иммунной системе цАМФ регулирует про- и противовоспалительную активность: препараты, повышающие уровень внутриклеточного цАМФ, снижают выработку провоспалительных медиаторов и увеличивают выработку противовоспалительных факторов во многих иммунных клетках.Этот обзор направлен на то, чтобы пролить свет на разнообразие процессов, на которые влияет цАМФ в иммунной системе, в отношении вариантов лечения заболеваний.

Путь цАМФ

Циклический аденозинмонофосфат, идентифицированный в 1957 году (2) как первый внутриклеточный вторичный мессенджер действия внеклеточного лиганда, в настоящее время признан универсальным регулятором метаболизма и экспрессии генов у всех форм жизни (3). Семейство ферментов, называемых аденилатциклазами (АС), катализирует образование цАМФ из АТФ.У позвоночных AC включают девять связанных с мембраной изоформ и одну растворимую изоформу (4). AC различаются по распределению и выраженности в развитии, а их регуляция сложна и зависит от изофермента. Помимо экспрессии и активности АЦ, гомеостаз цАМФ регулируется надсемейством фосфодиэстераз (ФДЭ), которые расщепляют внутриклеточные циклические нуклеотиды. PDE включает более 100 вариантов ферментов, разделенных на 11 семейств (5) в зависимости от их структуры, специфичности и модуляции циклическими нуклеотидами.Определенные ФДЭ повышают свою активность в ответ на цАМФ, а цАМФ стимулирует синтез новой мРНК ФДЭ (6, 7), в результате чего возникает петля обратной связи между уровнями цАМФ и активностью ФДЭ. Внося свой вклад в сложность пути, некоторые семейства ФДЭ строго специфичны к цАМФ (ФДЭ 4, 7 и 8), в то время как другие специфичны к циклическому гуанозинмонофосфату (цГМФ) (ФДЭ 5, 6 и 9) (8, 9). ). Дополнительные семейства гидролизуют как цАМФ, так и цГМФ (ФДЭ 1, 2, 3, 10 и 11), устанавливая перекрестную регуляцию обоих путей с важными последствиями для применения фармакотерапевтических средств, нацеленных на метаболизм циклических нуклеотидов (10, 11).

В качестве вторичного мессенджера циклический АМФ действует во многих нижестоящих путях. Прежде всего, он активирует цАМФ-зависимую протеинкиназу AI (PKA) (12) (см. рис. 1). При связывании цАМФ с регуляторными субъединицами PKA диссоциирует на свои регуляторные и каталитические субъединицы, а каталитические субъединицы фосфорилируют специфические остатки Ser и Thr на многочисленных белках-мишенях, инициируя последовательные сигнальные каскады, особенно в метаболизме питательных веществ (13).Кроме того, цАМФ-активированная PKA связывает и фосфорилирует цАМФ-чувствительные факторы транскрипции, включая белок, связывающий цАМФ-ответный элемент (CREB), членов семейства белков цАМФ-зависимого модулятора/индуцируемого раннего репрессора цАМФ (CREM/ICER) (14) , активирующий транскрипционный фактор-1 (ATF-1), NFκB и ядерные рецепторы (см. Рисунок 1). Фосфорилированные CREB, CREM и ATF-1 взаимодействуют с коактиваторами транскрипции CREB-связывающим белком (CBP) и p300 при связывании с цАМФ-ответными элементами (CRE) в генах-мишенях (15).Помимо активации PKA, цАМФ также непосредственно модулирует активность обменных белков фактора обмена гуанин-нуклеотидов (GEF) (Epacs) и каналов, управляемых циклическими нуклеотидами (CNG) (16), каждый из которых играет важную роль в клеточных функциях (17, 18). ). Помимо PKA, CREB, CREM и ATF-1 могут фосфорилироваться многими другими киназами, а действие PKA уравновешивается специфическими протеинфосфатазами.

Рисунок 1. цАМФ как регулятор иммунитета .Аденилатциклазы (AC) производят цАМФ из аденозинтрифосфата (АТФ). Высокий уровень цитозольного цАМФ приводит к активации протеинкиназы А (ПКА). Стимуляция PKA индуцирует фосфорилирование факторов транскрипции, таких как CREB, ICER/CREM, ATF-1 и CBP, для управления генами, управляемыми цАМФ. Фосфодиэстераза 4 (ФДЭ4) снижает уровень внутриклеточного цАМФ и уравновешивает эффект внутриклеточного цАМФ. ATF, цАМФ-зависимый фактор транскрипции; CBP, цАМФ-связывающий белок; CNG, циклический нуклеотид-управляемый ионный канал; CREB, белок, связывающий элемент ответа цАМФ; ICER, индуцируемый ранний репрессор цАМФ; Р, фосфорилирование.

Базальные уровни цитозольного цАМФ находятся в микрометровом диапазоне (19). В цитозоле цАМФ распределяется неравномерно, а скорее образует субмембранные пространственно дискретные пулы, генерируемые в микродоменах, содержащих AC, PDE рядом с PKA, локализованными белками, закрепляющими A-киназы (AKAP) (20). Специфичность в передаче сигналов цАМФ, а также тонкая и избирательная настройка его различных задач обеспечивается дифференциальной экспрессией различных изоформ и вариантов сплайсинга анаболических, катаболических и сигнальных молекул в различных тканях и типах клеток, а также дифференциальным составом микродоменов цАМФ (21).Хотя различные активности цАМФ могут иметь избыточные, независимые или противоположные эффекты в пределах одной и той же клетки (22), некоторые отдельные мыши с нокаутом AC и PDE и трансгенные мыши (23, 24) обнаруживают специфические фенотипы. В частности, индивидуальный контроль PDE выбирает события, регулируемые циклическими нуклеотидами, путем интеграции в неперекрывающиеся мультимолекулярные регуляторные сигнальные комплексы, указывая на клеточные или тканеспецифические интерференционные точки (25, 26).

В конце концов, важным, часто упускаемым из виду аспектом этого пути является секреция цАМФ во внеклеточное пространство и его передача через щелевые контакты между клетками (27).В то время как передаваемый цАМФ непосредственно способствует внутриклеточным уровням цАМФ, экскретируемый цАМФ превращается в АМФ и аденозин с помощью PDE, связанного с клеточной поверхностью, и экто-5′-нуклеотидаз CD39 и CD73. Передавая сигналы через аденозиновые рецепторы A2A и A2B, внеклеточный аденозин стимулирует AC и увеличивает образование внутриклеточного цАМФ (28). Нокаутные мыши с разрушенными CD39 и CD73 подчеркнули важность внеклеточного механизма обратной связи цАМФ-аденозин в физиологических процессах (29, 30).В иммунной системе внеклеточный цАМФ может способствовать регуляторной функции Т-клеток (Treg) (31, 32) и, как было показано, способствует дифференцировке моноцитов в дендритные клетки (ДК) (33).

Циклический АМФ в иммунном гомеостазе и патофизиологии

Благодаря своей множественной роли в клеточной физиологии цАМФ оказывает широкое модулирующее действие на различные клетки (см. рис. 2). В иммунной системе циклический АМФ регулирует активность как врожденных, так и адаптивных иммунных клеток (34).

Рис. 2.Влияние цАМФ на иммунные, опухолевые и эпителиальные клетки . Воздействие и функция циклического аденозинмонофосфата (цАМФ) на Т- и В-лимфоциты, гранулоциты, моноциты, макрофаги, дендритные клетки, эпителиальные клетки и клетки меланомы. LTB4, лейкотриен B4; LTC4, лейкотриен С4.

Моноциты и гранулоциты

Функциональное состояние моноцитов управляет воспалительной и репаративной фазами воспалительных реакций и, по-видимому, сопровождается изменениями уровня их внутриклеточного цАМФ.У мышей в крови циркулируют два основных типа моноцитов, Ly6C high и Ly6C low . Моноциты Ly6C high проявляют провоспалительную активность, тогда как моноциты Ly6C low патрулируют клетки, контролируют целостность тканей и проявляют противовоспалительную активность и активность по восстановлению тканей (35). Орфанный ядерный рецептор Nr4a1 (Nur77) регулирует экспрессию генов, связанных с воспалением. Воспалительные стимулы ингибируют его экспрессию и индуцируют воспалительный фенотип Ly6C high (36, 37).В свою очередь, Nur77 активируется и подавляет многочисленные воспалительные гены при переходе от воспалительного Ly6C high к противовоспалительному Ly6C low/neg состоянию (38–40). Повышенные уровни цАМФ индуцируют экспрессию Nur77 (41) и, таким образом, благоприятствуют фенотипу репараторных моноцитов (42). Благодаря этому воздействию на фагоциты повышенные уровни цАМФ влияют на иммунитет миелоидных клеток против патогенов и паразитов (43–45), а также могут влиять на дифференцировку инфильтрирующих опухоль клеток-супрессоров миелоидного происхождения (MDSC) путем подавления продукции TNF-α.Что касается последнего, было показано, что активация CREB повышает экспрессию miR-9, что способствует дифференцировке так называемых MDSC со значительно повышенной иммуносупрессивной функцией (46).

Таким образом, повышенные уровни цАМФ обычно ослабляют воспалительные функции моноцитов (47–50). Интересно, что бактерии и грибы воспользовались этим эффектом в ходе эволюции. Захват патогенов и запрограммированное уничтожение являются одними из наиболее важных действий клеток врожденного иммунитета для предотвращения проникновения в ткани и диссеминации патогенов.Некоторые микробактерии и грибы эволюционировали, чтобы захватить ось цАМФ хозяина путем введения микробных аденилатциклаз и гуанилатциклаз (51) и интоксикации клетки-хозяина предварительно сформированным цАМФ или токсинами аденилатциклазы (52–54). Bordetella pertussis, например, подавляет образование нейтрофильных внеклеточных ловушек (NET) за счет подавления лейкоцитов супрафизиологическими внутриклеточными уровнями цАМФ (55). Аналогичным образом, цАМФ бактериального происхождения или индуцированный бактериями способствует выживанию внутриклеточных бактерий за счет множественных действий, включая CREB-зависимую антиапоптотическую передачу сигналов и подавление внутриклеточного уничтожения бактерий в инвазированных моноцитах и ​​макрофагах.

NK-клетки

Натуральные клетки-киллеры (NK) способны уничтожать опухолевые клетки и инфицированные вирусом клетки (цитолиз) без предварительной сенсибилизации. В NK-клетках уровни цАМФ регулируют адгезию клеток-мишеней и цитотоксическую функцию. Как фармакологическая репрессия, так и индукция цАМФ ингибируют лизис клеток-мишеней, опосредованный перфорином и лигандом CD95 (56–60).

Дендритные клетки

Будучи профессиональными антигенпрезентирующими клетками иммунной системы, ДК обладают уникальной способностью индуцировать и регулировать адаптивные иммунные ответы.При ДК циклический АМФ подавляет высвобождение провоспалительных медиаторов (TNF-α, IL-17, IFN-γ) (61) и способствует высвобождению противовоспалительных медиаторов, таких как IL-10 (62). Как функциональное следствие, концентрации цАМФ в ДК регулируют Т-клеточный иммунитет (63). Фармакологическое ингибирование циклического нуклеотида PDE4, который в высокой степени экспрессируется в DC, например, подавляет Th2-поляризующую способность DC (64, 65) и вызывает секрецию IL-6 и TGF-бета и последующую индукцию дифференцировки Th27 (66).Таким образом, оказывается, что уровни цАМФ по-разному регулируют продукцию цитокинов ДК в ответ на изменения в микроокружении. Помимо пространственно-временной тонкой настройки активности ДК, активность цАМФ в ДК зависит от стадии созревания ДК: простагландин Е2 (PGE2), ключевой индуктор цАМФ, оказывает стимулирующее действие на незрелые ДК в периферических тканях (67), но ингибирующая функция зрелых ДК в лимфатических узлах (68).

В- и Т-клетки

В дополнение к врожденной функции клеток, цАМФ также контролирует многочисленные активности адаптивных иммунных клеток.В адаптивных иммунных клетках цАМФ в основном необходим для индукции антиген-стимулированной активации (69–72), но впоследствии ограничивает активацию, отрицательно регулируя передачу сигналов через В- и Т-клеточные рецепторы (TCR). В В-клетках он обеспечивает важный сигнал в индукции антиген-стимулированной пролиферации и продукции антител (69, 70, 72). Повышение уровня внутриклеточного цАМФ усиливает продукцию IgE, способствуя рекомбинации локусов тяжелой цепи Ig и способствуя дифференцировке Th3.В Т-клетках цАМФ участвует в регуляции почти всех функциональных активностей, начиная от периферического поддержания наивных Т-клеток (73) до их активации через TCR (74), приобретения эффекторной функции (75, 76) и памяти (77). . При родственной активации цАМФ действует как временный ингибирующий сигнал обратной связи, который ограничивает активацию Т-клеток через сигнальный путь цАМФ-PKA-Csk (74). В отличие от временного повышения, постоянно повышенный уровень цАМФ вызывает состояние, подобное анергии (78, 79). Аналогичным образом, анергирующие сигналы TCR приводят к увеличению внутриклеточных концентраций цАМФ, которые активируют ингибитор циклинзависимой киназы (CDK) p27kip1, секвестрируют комплексы циклин D2-cdk4 и циклин E/cdk2 и предотвращают продвижение через точку рестрикции G1 клеточного цикла. (80).Кроме того, уровни цАМФ регулируют приобретение эффекторной функции. Например, фармакологическая активация цАМФ путем ингибирования активности ФДЭ предотвращает развитие и функцию цитотоксических Т-лимфоцитов (ЦТЛ) (81). Значение цАМФ в приобретении эффекторных функций в Т-клетках также отражено наблюдением, что мыши с мутациями CREB имеют нормальное количество Т-клеток в тимусе, но обнаруживают заметный дефект пролиферации периферических Т-клеток и продукции IL-2, возникающий в результате G1-клеток. остановка цикла и апоптотическая гибель клеток (82).Наиболее заметно, что цАМФ является важным компонентом супрессивного механизма Treg (83–92). Treg содержат повышенные уровни цитозольного цАМФ, дополнительно повышают их уровень цАМФ при активации и доставляют цАМФ к клеткам-мишеням через щелевые контакты (83, 85). В клетке-мишени цАМФ ингибирует пролиферацию и дифференцировку эффекторных функций, частично вмешиваясь в экспрессию генов посредством ICER (90). Подавление накопления цАМФ в Treg путем либо ингибирования аденилатциклазы, применения цАМФ-специфического антагониста, либо сверхэкспрессии ФДЭ отменяет подавление мышиного и человеческого Treg (83, 84, 86, 91, 93).И наоборот, блокада деградации цАМФ путем ингибирования ФДЭ улучшает опосредованную Treg супрессию в мышиной модели астмы (85). В свою очередь, нефункциональные Treg у мышей с мутацией Foxp3, страдающих шелухой, имеют значительно сниженные уровни цитозольного цАМФ (94).

Повышенное образование цАМФ в Treg является предпосылкой их супрессивной активности (95) (см. рис. 3 и 4). Конститутивно высокие уровни цАМФ в Treg, по-видимому, вызваны вызванным Foxp3 снижением экспрессии PDE3B (96) и повышенной активностью AC9 (87), обусловленными их конститутивным активным состоянием (95).Во время супрессии, опосредованной Treg, цАМФ переносится через щелевые контакты в обычные Т-клетки (Tcon), где он подавляет продукцию IL-2 и ингибирует пролиферативный ответ (83). Фармакологическое ингибирование образования цАМФ устраняет супрессивную функцию Treg (см. рис. 3) (91).

Рисунок 3. Путь цАМФ в Treg и его регуляция с помощью IFN-α . Передача сигналов через Т-клеточный рецептор (TCR) приводит к активации аденилатциклазы, что приводит к повышению уровня цАМФ в регуляторных Т-клетках (Treg).цАМФ может переноситься через щелевые контакты в обычные Т-клетки (Tcon), тем самым опосредуя супрессивную активность Treg (A) . Фосфодиэстераза 4 (PDE4), которая может активироваться путями, связанными с MAP киназой ERK, снижает количество цАМФ в Treg путем ферментативного расщепления, нарушая регуляторную активность Treg (B) . IFN-α устраняет супрессивную функцию Treg путем восстановления цАМФ, восстанавливая активацию Tcon. Ингибирование пути ERK или PDE4, соответственно, приводит к возобновлению супрессивной способности обработанного IFN-α Treg (C) .

Рисунок 4. Функция цАМФ во взаимодействии обычных и регуляторных Т-клеток . В отличие от Tcon (синяя линия), Treg (зеленая линия) демонстрируют высокие уровни цАМФ (A) . Стимулированные Tcon демонстрируют высокую пролиферацию, тогда как Treg характеризуются низкой пролиферативной способностью [ (B) , левые панели, отдельная культура]. Treg эффективно ингибирует пролиферацию Tcon в экспериментах по совместному культивированию путем переноса цАМФ через щелевые контакты на Tcon [ (B) , совместное культивирование].Напротив, IFN-α устраняет супрессивную функцию Treg за счет снижения уровней цАМФ [ (A) , центральная панель], что приводит к восстановлению активации Tcon [ (B) , центральная панель]. Блокада пути ERK или PDE4, соответственно, увеличивает количество внутриклеточного цАМФ [ (A) , правая панель], возобновляет супрессивную активность Treg [ (B) , правая панель]. Tcon, обычные Т-клетки; Treg, регуляторные Т-клетки.

В этом контексте Bacher et al.показали, что IFN-α, противоопухолевый агент с хорошо известными аутоиммунными побочными эффектами, нарушает иммуносупрессивную активность человеческих CD4 + CD25 + Foxp3 + Treg, отключая активацию цАМФ при активации (92, 97) (см. рисунок). 3 и 4). Опосредованное IFN-α ингибирование подавления Treg может быть частично восстановлено фармакологическими ингибиторами, блокирующими активность ERK и PDE/PDE4 посредством специфических ингибиторов (92, 97) (см. рис. 3 и 4). Эти результаты согласуются с наблюдением, что человеческие Т-клетки преимущественно экспрессируют короткие изоформы PDE4B и PDE4D, функционально регулируемые киназой ERK2 MAP (98, 99).Поскольку ФДЭ играет важную роль в ингибировании Treg, опосредованном IFN-α, вмешательство специфичных ингибиторов ФДЭ4 может представлять собой терапевтический вариант для восстановления иммунной регуляции при аутоиммунных заболеваниях, таких как псориаз или красная волчанка, сопровождающихся снижением функции Treg (64, 100).

Помимо своей роли в Treg-супрессивном механизме, цАМФ необходим для образования и поддержания Treg: цАМФ-чувствительный транскрипционный фактор CREB стабилизирует экспрессию FoxP3, а также способствует и поддерживает фенотип Treg (101, 102).Treg по существу зависят от ИЛ-2 в отношении их периферической поддерживающей и супрессивной активности (103, 104), а их количество и активность можно терапевтически регулировать с помощью низких доз ИЛ-2 и определенных комплексов ИЛ-2/анти-ИЛ-2 (105, 105, 104). 106) для контроля аутоиммунных заболеваний и воспалений (107). Интересно, что IL-2 может способствовать увеличению продукции цАМФ в Treg за счет повышения активности аденилатциклазы AC7 (88). В сочетании с его ролью в контроле фенотипа Treg, его передача через щелевые контакты к и от Treg также, по-видимому, играет роль в жизненном цикле Treg, что подтверждается наблюдением, что количество Treg значительно снижено у мышей с нокаутом коннексина 43 (108). .

Некоторые вирусы предотвращают их отторжение иммунной системой, вмешиваясь в путь цАМФ в Т-клетках. Поверхностный гликопротеин gp120 ВИЧ-1 вызывает анергию в наивных Т-лимфоцитах (109, 110) и повышает уровень цАМФ и супрессивную активность в Treg (86, 111, 112). В свою очередь, репрессия цАМФ восстанавливает противовирусную функцию Т-клеток у пациентов с ВИЧ (113).

Помимо своей роли в иммунной регуляции, Treg выполняют гомеостатические функции, регулируя метаболическую активность в висцеральном жире и участвуя в восстановлении тканей.Функционально различные Treg накапливаются в поврежденных скелетных мышцах и участвуют в процессах репарации. Muscle Treg отчетливо экспрессирует фактор роста амфирегулин, который улучшает восстановление мышц, непосредственно воздействуя на мышечные сателлитные клетки (114). В соответствии с описанной ролью цАМФ в функции Treg, синтез амфирегулина ингибируется ингибиторами ПКА и усиливается лигандами, повышающими уровень цАМФ или непосредственно активирующими ПКА (115).

Вместе эти результаты классифицируют цАМФ как ключевой компонент функции иммунных клеток и раскрывают ферменты, регулирующие цАМФ, как молекулярные мишени для терапевтического вмешательства с иммунной активностью при патологических процессах, таких как аллергия и аутоиммунитет.

Модуляция цАМФ при аутоиммунных и воспалительных заболеваниях

Циклический AMP является центральным игроком в сети сигнальных путей, лежащих в основе патогенеза нескольких заболеваний, и несколько точек взаимодействия используются терапевтически при различных состояниях. Хотя клиническое влияние изменений в цАМФ остается не до конца определенным, тем не менее, можно сделать один фундаментальный вывод: вмешательства, которые усиливают выработку или действия цАМФ, обладают иммунодепрессивным потенциалом; и наоборот, репрессия цАМФ или передачи сигналов цАМФ обладает иммуностимулирующей способностью.

Образование цАМФ с помощью АЦ и расщепление с помощью ФДЭ определяет АЦ и ФДЭ как основные мишени для терапевтического вмешательства с уровнями цАМФ. На сегодняшний день активность AC в основном направлена ​​фармакологически посредством агонистов или антагонистов, влияющих на расположенные выше по течению рецепторы, связанные с G-белком (GPCR) (23, 116). Однако у мышей с нокаутом AC и у трансгенных мышей обнаружены индивидуальные и отчетливо отличающиеся физиологические функции изоформ AC (23). Наблюдение за тем, что отдельные изоформы играют доминирующую роль в определенных тканях, привело к тому, что АЦ стали рассматривать в качестве основных мишеней для лекарственных средств (117).Для достижения селективной интерференции требуются соединения, селективные по изоформе. Такие соединения в настоящее время ищут и тестируют. Здесь преследуется идея, что селективные ингибиторы вмешиваются тканеспецифическим образом, но остаются неэффективными в тканях, которые экспрессируют различные изоформы AC (118).

АС-специфические соединения уже достигли доклинических стадий, а другие были одобрены для лечения определенных заболеваний, например, гидрохлорид колфорсина даропата (NH547), производное форсколина, селективное к АС5 (FSK), для лечения прогрессирующей застойной сердечной недостаточности (119, 120).Таким образом, даже несмотря на то, что препараты, нацеленные на изоформы АЦ, все еще находятся на ранних стадиях разработки, обнаружение того, что АЦ имеют четко разделенные физиологические функции, по крайней мере, предполагает, что АЦ являются фармакологическими мишенями при широком спектре заболеваний, от нейродегенеративных расстройств до застойной сердечной недостаточности и легочной недостаточности. таких заболеваний, как астма и хроническая обструктивная болезнь легких (ХОБЛ).

С момента их обнаружения в 1958 г. (2) были предприняты постоянные усилия для улучшения понимания биологии и функции ФДЭ, и ФДЭ считались фармакологическими мишенями при различных заболеваниях, таких как легочные заболевания, такие как ХОБЛ и астма, депрессия, шизофрения, эректильная дисфункция. дисфункция и аутоиммунные заболевания, такие как псориаз/псориазный артрит и ревматоидный артрит (8, 100, 121–125).Хотя было разработано множество ингибиторов ФДЭ, их внедрение в клинику затруднено из-за их узкого терапевтического диапазона и побочных эффектов, таких как тошнота и рвота, возникающих даже при субтерапевтических дозах.

В иммунной системе члены семейства ФДЭ 3, 4 и 7 представляют собой преобладающие ферменты, расщепляющие цАМФ (126). ФДЭ4 кодируются четырьмя отдельными генами ( PDE4A–D ), и каждая ФДЭ4 контролирует неизбыточную клеточную функцию (127). Кроме того, более 20 вариантов PDE4 возникают в результате альтернативного сплайсинга мРНК или использования различных единиц транскрипции (5).В то время как PDE4A, PDE4B и PDE4D экспрессируются в иммунных клетках (Т- и В-клетках, нейтрофилах, эозинофилах, ДК, моноцитах, макрофагах), PD4C минимально активен или отсутствует (128, 129). ФДЭ3 и ФДЭ7 обнаруживаются в большинстве воспалительных клеток, включая Т- и В-клетки, NK и миелоидные клетки (6, 59, 127, 130–132). Однако преобладающими изоферментами, разрушающими цАМФ, являются ФДЭ4 (126, 127). Кроме того, уровни экспрессии изоферментов ФДЭ по-разному регулируются различными воспалительными стимулами (126, 127).Помимо иммунных клеток, члены PDE4 также экспрессируются в хондроцитах, гладкомышечных клетках, эпителиальных клетках и эндотелии сосудов (127). Повышая уровень внутриклеточного цАМФ, ингибиторы ФДЭ4 проявляют противовоспалительное действие почти во всех воспалительных и иммунных клетках и, как известно, подавляют множество воспалительных реакций, включая пролиферацию, хемотаксис, фагоцитоз и высвобождение провоспалительных медиаторов, таких как цитокины. и хемокины, активные формы кислорода, липидные медиаторы и гидролитические ферменты (34, 126, 129).Были запатентованы многочисленные селективные ингибиторы ФДЭ4, и некоторые из них прошли клинические испытания, включая такие заболевания, как астма, ХОБЛ, атопический дерматит, ревматоидный артрит и псориаз/псориазный артрит. Однако прием большинства этих соединений пришлось прекратить из-за узких терапевтических диапазонов. Дозы, необходимые для эффективного лечения, не могут быть достигнуты из-за побочных эффектов, таких как тошнота, рвота, диарея и боль в животе, которые являются наиболее распространенными. Было высказано предположение, что неблагоприятные побочные эффекты ингибиторов ФДЭ4 являются результатом их неселективности ко всем четырем подтипам ФДЭ4 и ингибирования ФДЭ4 в тканях, не являющихся мишенями, в дозах, аналогичных (или меньших), чем это необходимо для терапевтической эффективности.Предполагается, что блокирование PDE4D в органах, не являющихся мишенями, вызывает рвоту (133). Ввиду профиля побочных эффектов ингибиторов ФДЭ4 второго поколения были использованы новые стратегии разработки активных и не вызывающих рвоту соединений для преодоления побочных эффектов и улучшения терапевтических эффектов. В этом контексте, несмотря на высококонсервативные каталитические домены изоферментов ФДЭ4, были созданы специфические ингибиторы подтипа ФДЭ4. Например, были синтезированы мощные ингибиторы PDE4B с более чем 100-кратной селективностью по сравнению с PDE4D (134, 135).По сравнению с циломиластом, неселективным ингибитором ФДЭ4 (134), селективные ингибиторы ФДЭ4В продемонстрировали мощную противовоспалительную активность и значительно меньше побочных эффектов со стороны желудочно-кишечного тракта. Чтобы обойти побочные эффекты, наблюдаемые при пероральном введении, ингаляционное (136) и местное применение (137) ингибиторов ФДЭ4 исследовали при лечении воспалений дыхательных путей и воспалительных кожных заболеваний. Двухфазные исследования, проведенные с ингибитором PDE4 (AN2728) у пациентов с псориазом и атопическим дерматитом, показали многообещающие результаты (138, 139).Интерес к противовоспалительной активности ФДЭ4 возник в связи с ранними исследованиями прототипа ингибитора ФДЭ4, ролипрама (140). Однако, хотя ингибиторы ФДЭ4 в основном разрабатывались для лечения заболеваний легких, таких как астма или ХОБЛ, ни одно соединение еще не поступило на рынок для лечения астмы. Напротив, перорально активный ингибитор ФДЭ-4 рофлумиласт (Daliresp ® , Forest Pharmaceuticals) был одобрен для лечения ХОБЛ Европейским агентством по лекарственным средствам в 2010 г. и Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США в 2011 г. на основании четырех клинических испытаний.Эти исследования показали, что рофлумиласт улучшает функцию легких и снижает частоту обострений ХОБЛ у пациентов с симптомами хронического бронхита (141–144). Хотя побочные эффекты обычно были легкими или умеренными, все же сообщалось о тошноте, диарее, потере веса и головной боли (145). Несмотря на эти побочные эффекты, рофлумиласт был одобрен для лечения ХОБЛ с тяжелым ограничением скорости воздушного потока, симптомами хронического бронхита и обострениями в анамнезе в нескольких странах (146, 147).

Другим в настоящее время продаваемым пероральным ингибитором ФДЭ4 является апремиласт (Otezla ® , Celgene Corporation), который был одобрен EMA и FDA для лечения псориаза и псориатического артрита, двух аутоиммунных заболеваний, характеризующихся хроническим воспалением, поражением тканей и органов и ускоренным ростом. цикл клеток кожи.Апремиласт был разработан на основе фармакофора ролипрама и рофлумиласта путем сочетания ряда аналогов фталимида для оптимизации его активности и уменьшения побочных эффектов (148). Безопасность и эффективность апремиласта для лечения пациентов с бляшечным псориазом и псориазным артритом оценивали в многочисленных многоцентровых рандомизированных двойных слепых плацебо-контролируемых клинических исследованиях (ESTEEM-1 и -2 для псориаза, PALACE-1, -2). и -3 для псориатического артрита) (149–152). В двух исследованиях ESTEEM апремиласт уменьшал тяжесть и степень бляшечного псориаза средней и тяжелой степени (включая проявления на ногтях, волосистой части головы и ладонно-подошвенных) по сравнению с плацебо у взрослых.Аналогичным образом, в трех исследованиях PALACE (PALACE 1–3) апремиласт улучшал признаки и симптомы псориатического артрита по сравнению с плацебо у взрослых с активным заболеванием, несмотря на лечение обычными синтетическими и/или биологическими противоревматическими препаратами, модифицирующими заболевание. Согласно опубликованным клиническим исследованиям, апремиласт хорошо переносился во всех проанализированных группах исследования. На протяжении II и III фаз испытаний наиболее частыми побочными эффектами, о которых сообщалось, были головная боль, тошнота, диарея, рвота, назофарингит и инфекция верхних дыхательных путей при продолжении лечения.Однако исследования показали, что побочные эффекты со стороны желудочно-кишечного тракта обычно исчезают в течение месяца после начала терапии.

Интересным результатом клинических исследований является то, что улучшенная специфичность ингибитора не предотвращает побочные эффекты. Этот результат предполагает, что одни и те же или перекрывающиеся клеточные популяции вызывали как желаемые, так и нежелательные эффекты. В связи с недавними результатами исследований, касающихся экспрессии и активности анаболических и катаболических ферментов цАМФ в иммунных клетках, возникает вопрос, вызваны ли определенные эффекты ингибиторов ФДЭ4 изменением функций иммунных клеток.Этот вопрос подчеркивается сходством побочных эффектов в исследованиях ингибиторов ФДЭ4 и некоторых иммунотерапевтических подходов. К сожалению, до сих пор в клинических исследованиях ингибиторов ФДЭ не учитывались эффекты на отдельные популяции иммунных клеток. Для лучшего понимания основных причин желаемых и нежелательных эффектов такие исследования, по-видимому, крайне необходимы. Помимо их специфичности, эффективное вмешательство в путь цАМФ через ингибиторы зависит от их механизма действия.В принципе, ингибиторы могут действовать обратимо или необратимо. Необратимые ингибиторы связываются с ферментами ковалентными связями. Ковалентные ингибиторы обладают многими желательными характеристиками, включая повышенную биохимическую эффективность разрушения мишени, пониженную чувствительность к фармакокинетическим параметрам и увеличенную продолжительность действия, превышающую фармакокинетику соединения. Однако существует лишь несколько ингибиторов этого типа для анаболических и катаболических ферментов цАМФ, за исключением распространенного ингибитора ADCY MDL-12,330A, производного циклоалкиллактамида (153).Большинство ингибиторов обратимы, связываются с ферментом через нековалентные связи и обычно воздействуют на сайт связывания АТФ или на каталитическую часть. С нековалентными ингибиторами клетки могут быстро стать нечувствительными за счет восстановления активности фермента. Однако для повышения их активности ингибиторы могут быть связаны с белками, которые регулируют экспрессию белков. Благоприятный пример существует в протеолитическом нацеливании, таком как протеасомная система убиквитина (UPS) (154). Химерные молекулы протеолитического нацеливания, или PROTACS, содержат мотив распознавания UPS, связанный с ингибитором через линкер.В то время как первое поколение PROTAC страдало от ограниченной клеточной проницаемости, второе поколение было улучшено за счет использования пептидного фрагмента HIF1α в качестве мотива узнавания убиквитинлигазы E3 для увеличения проницаемости (155). Таким образом, в дополнение к разработке более специфических ингибиторов для достижения избирательного вмешательства, их ингибиторная активность может быть улучшена за счет протеолитического нацеливания, в частности, путем предотвращения резистентности клеток-мишеней.

Заключение и перспектива

Из-за своей центральной важности в качестве универсального регулятора метаболизма и экспрессии генов системное вмешательство в метаболизм цАМФ связано с многочисленными, иногда значительными, побочными эффектами.В дополнение или в качестве альтернативы разработке изоформ-специфических ингибиторов AC и PDE необходимо найти новые методы, с помощью которых эти ингибиторы могут быть доставлены конкретно в ткани и клетки. Новые стратегии могут включать разработку высокоспецифичных агентов, новых способов доставки (накожно, ингаляционно) или использование наночастиц для доставки лекарств в ткани или даже в клетки. Поскольку передача сигналов цАМФ контролирует очень разные процессы в разных клетках, лучшее понимание цАМФ-опосредованной активности в определенных типах клеток может помочь проложить путь к более специфическим вмешательствам в функцию клеток.В отличие от анаболического и катаболического метаболизма цАМФ, очень немногие препараты участвуют в передаче сигнала, и, таким образом, потенциальное использование таких действий остается неясным. Хотя передача сигналов цАМФ известна уже более 60 лет, она все еще раскрывает новые функциональные детали. Таким образом, терапевтическое вмешательство в его активность требует дальнейшего выяснения его роли в отдельных типах клеток и его взаимосвязей с другими сигнальными и метаболическими путями.

Вклад авторов

Все перечисленные авторы внесли существенный, непосредственный и интеллектуальный вклад в работу и одобрили ее для публикации.

Заявление о конфликте интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могли бы быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Финансирование

Работа выполнена при поддержке Немецкого исследовательского фонда (DFG): STE791/6-1, STE791/9-1, CRC 1066/B6, TR156/A4/C5; Немецкой организацией по борьбе с раком (110631) и грантами Университетского медицинского центра Майнца (все для К.С.).

Каталожные номера

1.Таскен К., Сколхегг Б.С., Таскен К.А., Сольберг Р., Кнутсен Х.К., Леви Ф.О. и др. Структура, функция и регуляция цАМФ-зависимых протеинкиназ человека. Adv Second Messenger Phosphoprotein Res (1997) 31 : 191–204. дои: 10.1016/S1040-7952(97)80019-5

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

2. Сазерленд Э.В., Ралл Т.В. Фракционирование и характеристика циклического аденинрибонуклеотида, образованного тканевыми частицами. J Biol Chem (1958) 232 :1077–91.

Академия Google

3. Биво Дж. А., Брантон Л. Л. Исследование циклических нуклеотидов – все еще расширяющееся спустя полвека. Nat Rev Mol Cell Biol (2002) 3 :710–8. дои: 10.1038/nrm911

Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

4. Дессауэр КВ. Аденилатциклаза — белковые комплексы, закрепляющие A-киназу: новое измерение в передаче сигналов цАМФ. Mol Pharmacol (2009) 76 :935–41. doi:10.1124/моль.109.059345

Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

5. Конти М., Биво Дж. Биохимия и физиология фосфодиэстераз циклических нуклеотидов: важные компоненты в передаче сигналов циклических нуклеотидов. Annu Rev Biochem (2007) 76 : 481–511. doi:10.1146/annurev.biochem.76.060305.150444

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

6.Эрдоган С., Хауслей, доктор медицины. Заражение Т-клеток Jurkat человека активатором аденилатциклазы форсколином вызывает серьезные изменения в экспрессии цАМФ-фосфодиэстеразы (ФДЭ) за счет повышения активности ФДЭ3 и индукции вариантов сплайсинга PDE4D1 и PDE4D2, а также подавления нового варианта сплайсинга PDE4A. Biochem J (1997) 321 (Pt 1): 165–75.

PubMed Резюме | Академия Google

7. Лорио М.М., Рефусс Р.П., Бреннан Р.Г., Гудман Р.Х.Сконструированные лейциновые молнии показывают, что гемифосфорилированные комплексы CREB являются транскрипционно активными. Proc Natl Acad Sci U S A (1993) 90 :9046–50. doi:10.1073/pnas.90.19.9046

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

8. П. В. П., Спина Д. Ингибиторы фосфодиэстеразы в лечении воспалительных заболеваний. Handb Exp Pharmacol (2011) 204 : 391–414. дои: 10.1007/978-3-642-17969-3_17

Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

10.Бегум Н., Шен В., Манганьелло В. Роль PDE3A в регуляции прогрессирования клеточного цикла в гладкомышечных клетках и ооцитах сосудов мышей: последствия сердечно-сосудистых заболеваний и бесплодия. Curr Opin Pharmacol (2011) 11 :725–9. doi:10.1016/j.coph.2011.10.006

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

11. Ван З-З, Чжан И, Чжан Х-Т, Ли И-Ф. Фосфодиэстераза: интерфейс, связывающий когнитивный дефицит с нервно-психическими и нейродегенеративными заболеваниями. Curr Pharm Des (2015) 21 :303–16. дои: 10.2174/1381612820666140826115559

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

12. Уолш Д.А., Перкинс Дж.П., Кребс Э.Г. Аденозин-3′,5′-монофосфат-зависимая протеинкиназа из скелетных мышц кролика. J Biol Chem (1968) 243 :3763–5.

Академия Google

13.Шабб Дж.Б. Физиологические субстраты цАМФ-зависимой протеинкиназы. Chem Rev (2001) 101 : 2381–411. дои: 10.1021/cr000236l

Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

14. Sassone-Corsi P. Факторы транскрипции, реагирующие на цАМФ. Annu Rev Cell Dev Biol (1995) 11 : 355–77. doi:10.1146/annurev.cb.11.110195.002035

Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

17.де Рой Дж., Зварткруис Ф.Дж., Верхейен М.Х., Кул Р.Х., Ниджман С.М., Виттингхофер А. и соавт. Epac представляет собой фактор обмена гуаниновых нуклеотидов Rap1, непосредственно активируемый циклическим АМФ. Природа (1998) 396 : 474–7. дои: 10.1038/24884

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

18. Кавасаки Х., Спрингетт Г.М., Мочизуки Н., Токи С., Накая М., Мацуда М. и др. Семейство цАМФ-связывающих белков, которые непосредственно активируют Rap1. Science (1998) 282 : 2275–9. doi:10.1126/наука.282.5397.2275

Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

19. Дао К.К., Тейген К., Копперуд Р., Ходнеланд Э., Шведе Ф., Кристенсен А.Е. и соавт. Epac1 и цАМФ-зависимая протеинкиназа холофермента имеют сходную аффинность к цАМФ, но их домены цАМФ имеют разные структурные особенности и распознавание циклических нуклеотидов. J Biol Chem (2006) 281 :21500–11.дои: 10.1074/jbc.M603116200

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

22. Aronoff DM, Canetti C, Serezani CH, Luo M, Peters-Golden M. Передний край: ингибирование макрофагов циклическим АМФ (цАМФ): дифференциальная роль протеинкиназы А и обменного белка, непосредственно активируемого цАМФ-1. J Immunol (2005) 174 :595–9. doi:10.4049/jиммунол.174.2.595

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

24.Морис Д.Х., Ке Х., Ахмад Ф., Ван Ю, Чунг Дж., Манганьелло В.К. Достижения в нацеливании на фосфодиэстеразы циклических нуклеотидов. Nat Rev Drug Discov (2014) 13 : 290–314. дои: 10.1038/nrd4228

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

25. Хауслей М.Д., Бэйли Г.С., Морис Д.Х. цАМФ-специфические ферменты фосфодиэстеразы-4 в сердечно-сосудистой системе: молекулярный набор инструментов для создания разделенной передачи сигналов цАМФ. Circ Res (2007) 100 : 950–66. doi:10.1161/01.RES.0000261934.56938.38

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

26. Крицер М.Д., Ли Дж., Додж-Кафка К., Капилофф М.С. AKAP: архитектурные основы локальной передачи сигналов цАМФ. J Mol Cell Cardiol (2012) 52 :351–8. doi:10.1016/j.yjmcc.2011.05.002

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

29.Enjyoji K, Sévigny J, Lin Y, Frenett PS, Christie PD, Esch JS, et al. Направленное разрушение дифосфогидролазы cd39/АТФ приводит к нарушению гемостаза и тромборегуляции. Nat Med (1999) 5 :1010–7. дои: 10.1038/12447

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

30. Кошалка П., Озуяман Б., Хуо Ю., Зернеке А., Флёгель У., Браун Н. и соавт. Целенаправленное разрушение cd73/экто-5′-нуклеотидазы изменяет тромборегуляцию и усиливает сосудистую воспалительную реакцию. Circ Res (2004) 95 : 814–21. doi:10.1161/01.RES.0000144796.82787.6f

Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

31. Курц С.С., Алам М.С., Эрнст П.Б. Внеклеточная продукция аденозина необходима для подавления Treg-опосредованного Th-клеток. FASEB J (2008) 22 :848.26. doi: 10.1096/fj.1530-6860

Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

32.Деальо С., Дуайер К.М., Гао В., Фридман Д., Ушева А., Эрат А. и др. Генерация аденозина, катализируемая CD39 и CD73, экспрессируемыми на регуляторных Т-клетках, опосредует подавление иммунитета. J Exp Med (2007) 204 :1257–65. doi:10.1084/jem.20062512

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

33. Sciaraffia E, Riccomi A, Lindstedt R, Gesa V, Cirelli E, Patrizio M, et al. Моноциты человека реагируют на внеклеточный цАМФ через аденозиновые рецепторы A2A и A2B. J Leukoc Biol (2014) 96 :113–22. doi:10.1189/jlb.3A0513-302RR

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

34. Serezani CH, Ballinger MN, Aronoff DM, Peters-Golden M. Циклический AMP: главный регулятор функции клеток врожденного иммунитета. Am J Respir Cell Mol Biol (2008) 39 :127–32. doi:10.1165/rcmb.2008-0091TR

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

35.Xu XJ, Reichner JS, Mastrofrancesco B, Henry WL, Albina JE. Простагландин Е2 подавляет липополисахарид-стимулируемую продукцию ИФН-бета. J Immunol (2008) 180 :2125–31. doi:10.4049/jиммунол.180.4.2125

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

36. Папак-Миличевич Н., Брейсс Дж. М., Зауец Дж., Рыбан Л., Плющ Т., Вагнер Г. А. и соавт. Стимулируемый интерфероном ген 12 инактивирует васкулопротекторные функции ядерных рецепторов NR4A. Circ Res (2012) 110 : e50–63. doi:10.1161/CIRCRESAHA.111.258814

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

37. Ютила М.А., Крозе Ф.Г., Ютила К.Л., Столл А.М., Фиринг С., Герценберг Л.А. и соавт. Ly-6C представляет собой антиген дифференцировки моноцитов/макрофагов и эндотелиальных клеток, регулируемый гамма-интерфероном. Eur J Immunol (1988) 18 (11):1819–26. doi:10.1002/eji.1830181125

Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

38.Ханна Р.Н., Карлин Л.М., Хаббелинг Х.Г., Нацкевич Д., Грин А.М., Пунт Дж.А. и др. Фактор транскрипции NR4A1 (Nur77) контролирует дифференцировку костного мозга и выживание Ly6C-моноцитов. Nat Immunol (2011) 12 :778–85. дои: 10.1038/ni.2063

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

39. Кэрри Дж.-К., Клерк Ф., Мину Х., Скио Л., Могер Дж., Наир А. и др. SAR156497, исключительно селективный ингибитор киназ aurora. J Med Chem (2015) 58 : 362–75. дои: 10.1021/jm501326k

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

40. Pei L, Castrillo A, Chen M, Hoffmann A, Tontonoz P. Индукция экспрессии ядерных рецепторов-сирот NR4A в макрофагах в ответ на воспалительные стимулы. J Biol Chem (2005) 280 :29256–62. дои: 10.1074/jbc.M502606200

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

42.Быстром Дж., Эванс И., Ньюсон Дж., Стейблз М., Тур И., ван Ройен Н. и др. Макрофаги фазы разрешения обладают уникальным воспалительным фенотипом, который контролируется цАМФ. Кровь (2008) 112 :4117–27. дои: 10.1182/кровь-2007-12-129767

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

44. Fülöp T, Fóris G, Wórum I, Leövey A. Возрастные изменения опосредованных гамма-рецептором Fc эффекторных функций полиморфноядерных лейкоцитов человека. Clin Exp Immunol (1985) 61 :425–32.

PubMed Резюме | Академия Google

45. Wirth JJ, Kierszenbaum F. Опосредование макрофагами ингибирующего действия повышенных внутриклеточных уровней аденозин-3’:5’циклического монофосфата (цАМФ) на ассоциацию макрофагов- Trypanosoma cruzi . Int J Parasitol (1984) 14 :401–4. дои: 10.1016/0020-7519(84)-1

Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

46.Tian J, Rui K, Tang X, Ma J, Wang Y, Tian X и др. МикроРНК-9 регулирует дифференцировку и функцию супрессорных клеток миелоидного происхождения посредством нацеливания на Runx1. J Immunol (2015) 195 :1301–11. doi:10.4049/jиммунол.1500209

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

47. Dent G, Giembycz MA, Rabe KF, Wolf B, Barnes PJ, Magnussen H. Теофиллин подавляет респираторный выброс альвеолярных макрофагов человека посредством ингибирования фосфодиэстеразы. Am J Respir Cell Mol Biol (1994) 10 : 565–72. дои: 10.1165/ajrcmb.10.5.8179921

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

48. Роу Дж., Финлей-Джонс Дж.Дж., Николас Т.Е., Боуден Дж., Мортон С., Харт П.Х. Неспособность гистамина регулировать продукцию ФНО-альфа альвеолярными макрофагами человека. Am J Respir Cell Mol Biol (1997) 17 : 218–26. дои: 10.1165/ajrcmb.17.2.2722

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

49.Абрахамсен Х., Бэйли Г., Нгай Дж., Ванг Т., Ника К., Руппельт А. и др. Опосредованное TCR и CD28 привлечение фосфодиэстеразы 4 к липидным рафтам усиливает передачу сигналов TCR. J Immunol (2004) 173 :4847–58. doi:10.4049/jиммунол.173.8.4847

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

50. Wall EA, Zavzavadjian JR, Chang MS, Randhawa B, Zhu X, Hsueh RC, et al. Подавление LPS-индуцированной продукции TNF-α в макрофагах с помощью цАМФ опосредовано PKA-AKAP95-p105. Sci Signal (2009) 2 : ra28–28. doi:10.1126/scisignal.2000202

Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

52. Pezard C, Weber M, Sirard JC, Berche P, Mock M. Защитный иммунитет, индуцированный штаммами с дефицитом токсина Bacillus anthracis. Infect Immun (1995) 63 :1369–72.

PubMed Резюме | Академия Google

53. Кут Дж.Г.Структурно-функциональные взаимосвязи между детерминантами токсина RTX грамотрицательных бактерий. FEMS Microbiol Rev (1992) 8 : 137–61. doi:10.1111/j.1574-6968.1992.tb04961.x

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

54. Агарвал Н., Ламичане Г., Гупта Р., Нолан С., Бишай В.Р. Интоксикация макрофагов циклическим АМФ аденилатциклазой Mycobacterium tuberculosis . Природа (2009) 460 : 98–102.дои: 10.1038/природа08123

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

55. Эби Дж. К., Грей М. С., Хьюлетт Э. Л. Опосредованное циклическим АМФ подавление образования внеклеточных ловушек нейтрофилов и апоптоза токсином аденилатциклазы Bordetella pertussis . Infect Immun (2014) 82 :5256–69. doi: 10.1128/IAI.02487-14

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

56.Уэлен М.М., Бэнкхерст А.Д. Влияние активации бета-адренергических рецепторов, холерного токсина и форсколина на функцию естественных клеток-киллеров человека. Biochem J (1990) 272 : 327–31. дои: 10.1042/bj2720327

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

57. Бариагабер А.К., Уэлен М.М. Снижение активности аденилатциклазы и цАМФ-зависимой протеинкиназы ингибирует цитотоксическую функцию естественных клеток-киллеров человека. Hum Immunol (2003) 64 :866–73. дои: 10.1016/S0198-8859(03)00154-X

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

58. Чжао В., Хуан Ю., Лю З., Цао Б.-Б., Пэн Ю.-П., Цю Ю.-Х. Рецепторы допамина модулируют цитотоксичность естественных клеток-киллеров через сигнальный путь цАМФ-PKA-CREB. PLoS One (2013) 8 :e65860. doi:10.1371/journal.pone.0065860

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

59.Гото М., Муракава М., Кадосима-Ямаока К., Танака Ю., Иноуэ Х., Мурафудзи Х. и др. Ингибитор фосфодиэстеразы 7А ASB16165 подавляет пролиферацию и продукцию цитокинов NKT-клетками. Cell Immunol (2009) 258 : 147–51. doi:10.1016/j.cellimm.2009.04.005

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

60. Torgersen KM, Vaage JT, Levy FO, Hansson V, Rolstad B, Tasken K. Избирательная активация цАМФ-зависимой протеинкиназы типа I ингибирует цитотоксичность естественных клеток-киллеров крыс. J Biol Chem (1997) 272 :5495–500. дои: 10.1074/jbc.272.9.5495

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

61. Bäumer W, Hoppmann J, Rundfeldt C, Kietzmann M. Высокоселективные ингибиторы фосфодиэстеразы 4 для лечения аллергических заболеваний кожи и псориаза. Inflamm Allergy Drug Targets (2007) 6 :17–26. дои: 10.2174/187152807780077318

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

62.Оже С., Мехат С., Даллот Э., Каброл Д., Лерой М.-Дж. Доказательства роли фосфодиэстеразы 4 в липополисахарид-стимулированной продукции простагландина Е2 и активности матриксной металлопротеиназы-9 в амниохориальных мембранах человека. J Immunol (2005) 174 :8082–9. doi:10.4049/jиммунол.174.12.8082

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

63. Lee J, Kim TH, Murray F, Li X, Choi SS, Broide DH, et al.Концентрации циклического АМФ в дендритных клетках индуцируют и регулируют Th3-иммунитет и аллергическую астму. Proc Natl Acad Sci U S A (2015) 112 :1529–34. doi:10.1073/pnas.1417972112

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

64. Шетт Г., Слоан В.С., Стивенс Р.М., Шафер П. Апремиласт: новый ингибитор ФДЭ4 при лечении аутоиммунных и воспалительных заболеваний. Ther Adv Musculoskelet Dis (2010) 2 : 271–8.дои: 10.1177/1759720X10381432

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

65. Heystek HC, Thierry A-C, Soulard P, Moulon C. Ингибиторы фосфодиэстеразы 4 снижают выработку воспалительных цитокинов дендритными клетками человека и поляризационную способность Th2. Int Immunol (2003) 15 :827–35. дои: 10.1093/интимм/dxg079

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

66.Датта С.К., Сабет М., Нгуен К.П.Л., Вальдес П.А., Гонсалес-Навахас Дж.М., Ислам С. и др. Мукозальная адъювантная активность холерного токсина требует клеток Th27 и защищает от ингаляционной сибирской язвы. Proc Natl Acad Sci U S A (2010) 107 :10638–43. doi:10.1073/pnas.1002348107

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

67. Legler DF, Krause P, Scandella E, Singer E, Groettrup M. Простагландин E2 обычно необходим для миграции дендритных клеток человека и оказывает свое действие через рецепторы EP2 и EP4. J Immunol (2006) 176 :966–73. doi:10.4049/jиммунол.176.2.966

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

68. Harizi H, Juzan M, Grosset C, Rashedi M, Gualde N. Дендритные клетки, выделенные in vitro из костного мозга, продуцируют PGE(2), который способствует иммуномодуляции, индуцированной антигенпрезентирующими клетками. Cell Immunol (2001) 209 : 19–28. doi:10.1006/cimm.2001.1785

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

69.Гилберт К.М., Хоффманн М.К. цАМФ является важным сигналом в индукции продукции антител В-клетками, но ингибирует хелперную функцию Т-клеток. J Immunol (1985) 135 :2084–9.

PubMed Резюме | Академия Google

70. Леви Ф.О., Расмуссен А.М., Таскен К., Скальхегг Б.С., Хуитфельдт Х.С., Фундеруд С. и соавт. Циклическая АМФ-зависимая протеинкиназа (сАК) в В-клетках человека: совместная локализация сАК I типа (RI альфа 2 С2) с рецептором антигена во время антииммуноглобулин-индуцированной активации В-клеток. Eur J Immunol (1996) 26 :1290–6. дои: 10.1002/эджи.1830260617

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

72. Вортис Х.Х., Тойч М., Хигер М., Чжэн Дж., Паркер Д.К. Активация В-клеток путем перекрестного связывания поверхностных IgM или лигирования CD40 включает альтернативные сигнальные пути и приводит к различным фенотипам В-клеток. Proc Natl Acad Sci USA (1995) 92 :3348–52. дои: 10.1073/пнас.92.8.3348

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

73. Cekic C, Sag D, Day Y-J, Linden J. Внеклеточный аденозин регулирует развитие наивных Т-клеток и поддержание периферического обмена. J Exp Med (2013) 210 : 2693–706. doi:10.1084/jem.20130249

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

74. Ванг Т., Торгерсен К.М., Сундволд В., Саксена М., Леви Ф.О., Сколхегг Б.С. и соавт.Активация СООН-концевой киназы Src (Csk) цАМФ-зависимой протеинкиназой ингибирует передачу сигналов через Т-клеточный рецептор. J Exp Med (2001) 193 : 497–507. doi:10.1084/jem.193.4.497

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

75. Liopeta K, Boubali S, Virgilio L, Thyphronitis G, Mavrothalassitis G, Dimitracopoulos G, et al. цАМФ регулирует продукцию IL-10 нормальными Т-лимфоцитами человека на нескольких уровнях: возможная роль MEF2. Мол Иммунол (2009) 46 :345–54. doi:10.1016/j.molimm.2008.10.025

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

76. Hedrich CM, Crispin JC, Rauen T, Ioannidis C, Apostolidis SA, Lo MS, et al. Модулятор элемента ответа цАМФ α контролирует экспрессию IL2 и IL17A во время фиксации линии CD4 и распределения подмножества при волчанке. Proc Natl Acad Sci U S A (2012) 109 :16606–11.doi:10.1073/pnas.1210129109

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

77. Vig M, George A, Sen R, Durdik J, Rath S, Bal V. Приверженность активированных Т-клеток вторичной реактивности усиливается сигналами, опосредованными цАМФ-зависимой протеинкиназой A-I. Mol Pharmacol (2002) 62 :1471–81. doi:10.1124/мол.62.6.1471

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

78.Конус Р.Е., Кокрейн Р., Лингенхельд Э.Г., Кларк Р.Б. Повышение уровня внутриклеточного циклического АМФ индуцирует анергическое состояние в клонах Th2. Cell Immunol (1996) 173 : 246–51. doi:10.1006/cimm.1996.0274

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

79. Пауэлл Д.Д., Лернер К.Г., Эвольдт Г.Р., Шварц Р.Х. Сайт -180 промотора IL-2 является мишенью связывания CREB/CREM при анергии Т-клеток. J Immunol (1999) 163 :6631–9.

PubMed Резюме | Академия Google

80. Appleman LJ, Tzachanis D, Grader-Beck T, van Puijenbroek AA, Boussiotis VA. Анергия хелперных Т-клеток: от биохимии к патофизиологии и терапии рака. J Mol Med (Берл) (2001) 78 :673–83. дои: 10.1007/s0010

180

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

81. Кадошима-Ямаока К., Муракава М., Гото М., Танака Ю., Иноуэ Х., Мурафудзи Х. и др.Влияние ингибитора фосфодиэстеразы 7 ASB16165 на развитие и функцию цитотоксических Т-лимфоцитов. Int Immunopharmacol (2009) 9 : 97–102. doi:10.1016/j.intimp.2008.10.005

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

82. Бодор Дж., Спец А.Л., Стромингер Дж.Л., Хабенер Дж.Ф. Индуцируемость цАМФ репрессора транскрипции ICER в развивающихся и зрелых Т-лимфоцитах человека. Proc Natl Acad Sci USA (1996) 93 :3536–41.doi:10.1073/pnas.93.8.3536

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

83. Бопп Т., Беккер С., Клейн М., Клейн-Хесслинг С., Пальметсхофер А., Серфлинг Э. и соавт. Циклический аденозинмонофосфат является ключевым компонентом регуляторной Т-клеточно-опосредованной супрессии. J Exp Med (2007) 204 :1303–10. doi:10.1084/jem.20062129

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

84.Oberle N, Eberhardt N, Falk CS, Krammer PH, Suri-Payer E. Быстрое подавление транскрипции цитокинов в Т-клетках CD4+CD25 человека регуляторными Т-клетками CD4+Foxp3+: независимость от потребления IL-2, TGF-бета и различных ингибиторы передачи сигналов TCR. J Immunol (2007) 179 :3578–87. doi:10.4049/jиммунол.179.6.3578

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

85. Бопп Т., Дехзад Н., Рейтер С., Кляйн М., Ульрих Н., Стассен М. и соавт.Ингибирование деградации цАМФ улучшает подавление, опосредованное регуляторными Т-клетками. J Immunol (2009) 182 :4017–24. doi:10.4049/jиммунол.0803310

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

86. Беккер С., Таубе С., Бопп Т., Беккер С., Мишель К., Кубач Дж. и др. Защита от реакции «трансплантат против хозяина» с помощью gp120-опосредованной активации белка оболочки ВИЧ-1 регуляторных Т-клеток CD4+CD25+ человека. Кровь (2009) 114 :1263–9.дои: 10.1182/кровь-2009-02-206730

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

87. Huang B, Zhao J, Lei Z, Shen S, Li D, Shen G-X и др. миР-142-3p ограничивает продукцию цАМФ в CD4+CD25-T-клетках и CD4+CD25+ TREG-клетках путем нацеливания на мРНК AC9. EMBO Rep (2009) 10 :180–5. doi:10.1038/embor.2008.224

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

88.Бажин А.В., Канерт С., Кимпфлер С., Шадендорф Д., Уманский В. Различный метаболизм циклического аденозинмонофосфата в регуляторных и хелперных CD4+ Т-клетках. Мол Иммунол (2010) 47 :678–84. doi:10.1016/j.molimm.2009.10.032

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

89. Фассбендер М., Герлицки Б., Ульрих Н., Лупп С., Кляйн М., Радсак М.П. и соавт. Циклический аденозинмонофосфат и IL-10 координировано способствуют опосредованному nTreg подавлению активации дендритных клеток. Cell Immunol (2010) 265 : 91–6. doi:10.1016/j.cellimm.2010.07.007

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

90. Vaeth M, Gogishvili T, Bopp T, Klein M, Berberich-Siebelt F, Gattenloehner S, et al. Регуляторные Т-клетки способствуют накоплению в ядре индуцируемого раннего репрессора цАМФ (ICER) и подавляют ядерный фактор активированных Т-клеток c1 (NFATc1). Proc Natl Acad Sci U S A (2011) 108 :2480–5.doi:10.1073/pnas.1009463108

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

91. Кляйн М., Вет М., Шеел Т., Граббе С., Баумграсс Р., Берберих-Зибельт Ф. и соавт. Подавление активации циклического аденозинмонофосфата обезоруживает и расширяет регуляторные Т-клетки человека. J Immunol (2012) 188 :1091–7. doi:10.4049/jиммунол.1102045

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

92.Бахер Н., Ракер В., Хофманн С., Граулич Э., Швенк М., Баумграсс Р. и др. Интерферон-α подавляет цАМФ, чтобы разоружить регуляторные Т-клетки человека. Cancer Res (2013) 73 : 5647–56. дои: 10.1158/0008-5472.CAN-12-3788

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

93. Martin H, Reuter S, Dehzad N, Heinz A, Bellinghausen I, Saloga J, et al. Активация регуляторных Т-клеток, опосредованная CD4, ингибирует развитие заболевания в модели аллергического заболевания дыхательных путей на гуманизированных мышах. J Allergy Clin Immunol (2012) 129 :e1–7. doi:10.1016/j.jaci.2011.09.038

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

94. Lahl K, Mayer CT, Bopp T, Huehn J, Loddenkemper C, Eberl G, et al. Нефункциональные регуляторные Т-клетки и дефектный контроль продукции цитокинов Th3 у мышей с естественной цингой. J Immunol (2009) 183 :5662–72. doi:10.4049/jиммунол.0803762

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

95.Vahl JC, Drees C, Heger K, Heink S, Fischer JC, Nedjic J, et al. Непрерывные сигналы Т-клеточного рецептора поддерживают функциональный регуляторный пул Т-клеток. Иммунитет (2014) 41 :722–36. doi:10.1016/j.immuni.2014.10.012

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

96. Gavin MA, Torgerson TR, Houston E, DeRoos P, Ho WY, Stray-Pedersen A, et al. Анализ отдельных клеток нормальных и FOXP3-мутантных Т-клеток человека: экспрессия FOXP3 без развития регуляторных Т-клеток. Proc Natl Acad Sci U S A (2006) 103 :6659–64. doi:10.1073/pnas.0509484103

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

99. Peter D, Jin SLC, Conti M, Hatzelmann A, Zitt C. Дифференциальная экспрессия и функция подтипов фосфодиэстеразы 4 (PDE4) в первичных CD4+ T-клетках человека: преобладающая роль PDE4D. J Immunol (2007) 178 :4820–31. doi:10.4049/иммунол.178.8.4820

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

100. Чирикоцци А., Капосиена Д., Гарофало В., Канниццаро ​​М.В., Чименти С., Сарачено Р. Новое лекарство для лечения бляшечного псориаза средней и тяжелой степени: апремиласт. Expert Rev Clin Immunol (2015) 12 :237–49. дои: 10.1586/1744666X.2016.1134319

Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

102.Ким Х-П, Леонард В.Дж. CREB/ATF-зависимая экспрессия гена FoxP3, индуцированная Т-клеточным рецептором: роль метилирования ДНК. J Exp Med (2007) 204 :1543–51. doi:10.1084/jem.20070109

Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

103. de la Rosa M, Rutz S, Dorninger H, Scheffold A. Интерлейкин-2 необходим для регуляторной функции CD4+CD25+ Т-клеток. Eur J Immunol (2004) 34 :2480–8. дои: 10.1002 / эдзи.200425274

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

104. Бэррон Л., Думс Х., Хойер К.К., Кусванто В., Хофманн Дж., О’Горман В.Е. и др. Передний край: механизмы зависимого от ИЛ-2 поддержания функциональных регуляторных Т-клеток. J Immunol (2010) 185 :6426–30. doi:10.4049/jиммунол.0

0

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

105.Бойман О., Ковар М., Рубинштейн М.П., ​​Сурх К.Д., Спрент Дж. Селективная стимуляция субпопуляций Т-клеток иммунными комплексами антитело-цитокин. Science (2006) 311 : 1924–7. doi:10.1126/наука.1122927

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

106. Webster KE, Walters S, Kohler RE, Mrkvan T, Boyman O, Surh CD, et al. Экспансия T reg клеток in vivo с помощью комплексов IL-2-mAb: индукция резистентности к ЭАЭ и долгосрочное принятие островковых аллотрансплантатов без иммуносупрессии. J Exp Med (2009) 206 :751–60. doi:10.1084/jem.20082824

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

109. Рахмуни С., Аандал Э.М., Найджиб Б., Зедду М., Джаннини С., Верлает М. и соавт. Зависимая от циклооксигеназы типа 2 секреция простагландина Е2 участвует в вызванной ретровирусом дисфункции Т-клеток у мышей. Biochem J (2004) 384 : 469–76. дои: 10.1042/BJ20031859 ​​

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

110.Маски А.М., Галгани М., Кассано С., Де Симоне С., Галло А., Де Роса В. и др. gp120 ВИЧ-1 индуцирует анергию в наивных Т-лимфоцитах посредством передачи сигналов, опосредованной CD4-независимой протеинкиназой-А. J Leukoc Biol (2003) 74 :1117–24. doi:10.1189/jlb.0503239

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

111. Морено-Фернандес М.Э., Руэда К.М., Руси Л.К., Шугнет К.А. Регуляторные Т-клетки контролируют репликацию ВИЧ в активированных Т-клетках посредством цАМФ-зависимого механизма. Кровь (2011) 117 :5372–80. дои: 10.1182/кровь-2010-12-323162

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

112. Хофманн Б., Нишанян П., Нгуен Т., Лю М., Фэйи Дж.Л. Восстановление функции Т-клеток при ВИЧ-инфекции путем снижения уровня внутриклеточного цАМФ аналогами аденозина. AIDS (1993) 7 :659–64. дои: 10.1097/00002030-19

00-00008

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

113.Хофманн Б., Нишанян П., Нгуен Т., Инсиксиенгмай П., Фэйи Дж.Л. Белки вируса иммунодефицита человека индуцируют ингибирующий путь цАМФ/протеинкиназы А в нормальных лимфоцитах. Proc Natl Acad Sci USA (1993) 90 :6676–80. doi:10.1073/pnas.90.14.6676

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

114. Бурзин Д., Кусванто В., Колодин Д., Шадрах Д.Л., Черлетти М., Джанг И. и др. Особая популяция регуляторных Т-клеток потенцирует восстановление мышц. Сотовый (2013) 155 : 1282–95. doi:10.1016/j.cell.2013.10.054

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

115. Braeuning A. Связь β-катенина и фенобарбитала с гепатоканцерогенезом мышей: критическое обсуждение Awuah et al., PLoS ONE 7 (6):e39771, 2012. Arch Toxicol (2013) 87 : 401–2. doi:10.1007/s00204-012-1002-4

Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

117.Ивацубо К., Минамисава С., Цунэмацу Т., Накагоме М., Тоя Ю., Томлинсон Дж. Э. и др. Прямое ингибирование аденилатциклазы 5 типа предотвращает апоптоз миокарда без функционального ухудшения. J Biol Chem (2004) 279 :40938–45. дои: 10.1074/jbc.M314238200

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

118. Окумура С., Кавабе Дж., Ятани А., Такаги Г., Ли М.-С., Хонг С. и др. Нарушение аденилатциклазы 5 типа изменяет не только симпатическую, но также парасимпатическую и кальций-опосредованную регуляцию сердца. Circ Res (2003) 93 : 364–71. doi:10.1161/01.RES.0000086986.35568.63

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

119. Аласбахи Р.Х., Мельциг М.Ф. Plectranthus barbatus : обзор фитохимии, этноботанического использования и фармакологии – часть 2. Planta Med (2010) 76 :753–65. дои: 10.1055/s-0029-1240919

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

120.Toya Y, Schwencke C, Ishikawa Y. Производные форсколина с повышенной селективностью в отношении сердечной аденилатциклазы. J Mol Cell Cardiol (1998) 30 : 97–108. doi:10.1006/jmcc.1997.0575

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

122. Hatzelmann A, Morcillo EJ, Lungarella G, Adnot S, Sanjar S, Beume R, et al. Доклиническая фармакология рофлумиласта — селективного перорального ингибитора фосфодиэстеразы 4, разрабатываемого для лечения хронической обструктивной болезни легких. Pulm Pharmacol Ther (2010) 23 :235–56. doi:10.1016/j.pupt.2010.03.011

Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

124. Сюцяк Я.А. Роль фосфодиэстераз при шизофрении: терапевтические последствия. CNS Drugs (2008) 22 :983–93. дои: 10.2165/0023210-200822120-00002

Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

125.Миллар Дж.К., Пикард Б.С., Маки С., Джеймс Р., Кристи С., Бьюкенен С.Р. и др. DISC1 и PDE4B являются взаимодействующими генетическими факторами при шизофрении, которые регулируют передачу сигналов цАМФ. Science (2005) 310 : 1187–91. doi:10.1126/наука.1112915

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

126. Торфи Т.Дж. Изоферменты фосфодиэстеразы: молекулярные мишени для новых противоастматических средств. Am J Respir Crit Care Med (1998) 157 :351–70.doi:10.1164/ajrccm.157.2.9708012

Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

127. Джин С-Л.С., Дин С.Л., Линь С.К. Фосфодиэстераза 4 и ее ингибиторы при воспалительных заболеваниях. Chang Gung Med J (2012) 35 : 197–210.

PubMed Резюме | Академия Google

128. Spina D, McFadzean I, Bertram FKR, Page CP. Периферические механизмы II: фармакология периферически активных противокашлевых препаратов. Handb Exp Pharmacol (2009) 187 :155–86. дои: 10.1007/978-3-540-79842-2_8

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

129. Пресс Нью-Джерси, Баннер К.Х. Ингибиторы ФДЭ4 – обзор современной области. Prog Med Chem (2009) 47 :37–74. дои: 10.1016/S0079-6468(08)00202-6

Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

131.Тенор Х., Хатцельманн А., Купфершмидт Р., Станчу Л., Джуканович Р., Шудт С. и др. Активность изофермента циклической нуклеотидной фосфодиэстеразы в альвеолярных макрофагах человека. Clin Exp Allergy (1995) 25 :625–33. doi:10.1111/j.1365-2222.1995.tb01110.x

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

132. Тенор Х., Станичиу Л., Шудт С., Хатцельманн А., Вендел А., Джуканович Р. и др. Циклические нуклеотидные фосфодиэстеразы из очищенных CD4+ и CD8+ Т-лимфоцитов человека. Clin Exp Allergy (1995) 25 :616–24. doi:10.1111/j.1365-2222.1995.tb01109.x

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

133. Robichaud A, Stamatiou PB, Jin S-LC, Lachance N, MacDonald D, Laliberte F, et al. Делеция фосфодиэстеразы 4D у мышей укорачивает опосредованную альфа-(2)-адренорецепторами анестезию, что является поведенческим коррелятом рвоты. J Clin Invest (2002) 110 :1045–52.дои: 10.1172/JCI15506

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

134. Наганума К., Омура А., Маэкавара Н., Сайто М., Окава Н., Кубота Т. и др. Открытие селективных ингибиторов PDE4B. Bioorg Med Chem Lett (2009) 19 :3174–6. doi:10.1016/j.bmcl.2009.04.121

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

135. Бургин А.Б., Магнуссон О.Т., Сингх Дж., Витте П., Стакер Б.Л., Бьорнссон Дж.М. и соавт.Разработка аллостерических модуляторов фосфодиэстеразы 4D (PDE4D) для улучшения когнитивных функций с повышенной безопасностью. Nat Biotechnol (2010) 28 : 63–70. doi:10.1038/nbt.1598

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

137. Кагаяма К., Моримото Т., Нагата С., Катох Ф., Чжан С., Иноуэ Н. и др. Синтез и биологическая оценка новых производных фталазинона в качестве местных активных ингибиторов фосфодиэстеразы 4. Bioorg Med Chem (2009) 17 :6959–70. doi:10.1016/j.bmc.2009.08.014

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

138. Назарян Р., Вайнберг Дж.М. AN-2728, ингибитор ФДЭ4 для потенциального местного лечения псориаза и атопического дерматита. Curr Opin Investig Drugs (2009) 10 :1236–42.

Академия Google

139.Акама Т., Бейкер С.Дж., Чжан Ю.К., Эрнандес В., Чжоу Х., Сандерс В. и др. Открытие и изучение структуры и активности нового противовоспалительного средства бензоксаборола (AN2728) для потенциального местного лечения псориаза и атопического дерматита. Bioorg Med Chem Lett (2009) 19 :2129–32. doi:10.1016/j.bmcl.2009.03.007

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

140. Конти М., Рихтер В., Мехатс К., Ливера Г., Пак Дж.-Й., Джин К.Циклические AMP-специфические фосфодиэстеразы PDE4 как критические компоненты передачи сигналов циклического AMP. J Biol Chem (2003) 278 :5493–6. дои: 10.1074/jbc.R200029200

Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

141. Rennard SI, Calverley PMA, Goehring UM, Bredenbröker D, Martinez FJ. Уменьшение обострений с помощью ингибитора ФДЭ4 рофлумиласта – важность определения различных подгрупп пациентов с ХОБЛ. Respir Res (2011) 12 :18.дои: 10.1186/1465-9921-12-18

Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

142. Rabe KF, Bateman ED, O’Donnell D, Witte S, Bredenbröker D, Bethke TD. Рофлумиласт – пероральное противовоспалительное средство для лечения хронической обструктивной болезни легких: рандомизированное контролируемое исследование. Ланцет (2005) 366 : 563–71. дои: 10.1016/S0140-6736(05)67100-0

Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

143.Калверли П.М.А., Санчес-Торил Ф., МакИвор А., Тайхманн П., Бреденброкер Д., Фаббри Л.М. Эффект 1-летнего лечения рофлумиластом при тяжелой хронической обструктивной болезни легких. Am J Respir Crit Care Med (2007) 176 :154–61. doi:10.1164/rccm.200610-1563OC

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

144. Calverley PMA, Rabe KF, Goehring UM, Kristiansen S, Fabbri LM, Martinez FJ. Учебные группы М2-124 и М2-125.Рофлумиласт при симптоматической хронической обструктивной болезни легких: два рандомизированных клинических исследования. Ланцет (2009) 374 : 685–94. дои: 10.1016/S0140-6736(09)61255-1

Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

145. Гембыч М.А., Филд С.К. Рофлумиласт: первый ингибитор фосфодиэстеразы 4, одобренный для лечения ХОБЛ. Drug Des Devel Ther (2010) 4 : 147–58.

PubMed Резюме | Академия Google

146.Беге Б., Рабе К.Ф., Фаббри Л.М. Терапия ингибиторами фосфодиэстеразы-4 при заболеваниях легких. Am J Respir Crit Care Med (2013) 188 :271–8. doi:10.1164/rccm.201301-0021PP

Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

147. Малхолл А.М., Дроге К.А., Эрнст Н.Е., Панос Р.Дж., Зафар М.А. Ингибиторы фосфодиэстеразы 4 для лечения хронической обструктивной болезни легких: обзор существующих и разрабатываемых препаратов. Expert Opin Investig Drugs (2015) 24 :1597–611.дои: 10.1517/13543784.2015.1094054

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

148. Man H-W, Schafer P, Wong LM, Patterson RT, Corral LG, Raymon H, et al. Открытие (S)-N-[2-[1-(3-этокси-4-метоксифенил)-2-метансульфонилэтил]-1,3-диоксо-2,3-дигидро-1H-изоиндол-4-ил]ацетамида (апремиласт), сильнодействующий перорально активный ингибитор фосфодиэстеразы 4 и фактора некроза опухоли-альфа. J Med Chem (2009) 52 :1522–4.дои: 10.1021/jm0d

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

149. Kavanaugh A, Mease PJ, Gomez-Reino JJ, Adebajo AO, Wollenhaupt J, Gladman DD, et al. Долгосрочные (52 недели) результаты рандомизированного контролируемого исследования III фазы апремиласта у пациентов с псориатическим артритом. J Rheumatol (2015) 42 :479–88. doi:10.3899/jrheum.140647

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

150.Зерилли Т., Очеретянер Э. Апремиласт (Отезла): новый пероральный препарат для взрослых с псориазом и псориатическим артритом. P T (2015) 40 :495–500.

PubMed Резюме | Академия Google

151. Papp K, Reich K, Leonardi CL, Kircik L, Chimenti S, Langley RGB, et al. Апремиласт, пероральный ингибитор фосфодиэстеразы 4 (ФДЭ4), у пациентов с бляшечным псориазом средней и тяжелой степени: результаты рандомизированного контролируемого исследования III фазы (исследование эффективности и безопасности, оценивающее эффекты апремиласта при псориазе [ESTEEM] 1). J Am Acad Dermatol (2015) 73 : 37–49. doi:10.1016/j.jaad.2015.03.049

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

152. Кавано А., Миз П.Дж., Гомес-Рейно Дж.Дж., Адебахо А.О., Волленхаупт Дж., Гладман Д.Д. и соавт. Лечение псориатического артрита в рандомизированном плацебо-контролируемом исследовании фазы 3 апремиластом, пероральным ингибитором фосфодиэстеразы 4. Энн Реум Дис (2014) 73 :1020–6.doi:10.1136/annrheumdis-2013-205056

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

155. Zhang D, Baek SH, Ho A, Kim K. Деградация целевого белка в живых клетках с помощью низкомолекулярных индукторов протеолиза. Bioorg Med Chem Lett (2004) 14 :645–8. doi:10.1016/j.bmcl.2003.11.042

PubMed Резюме | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Генерация цАМФ в эндосомах при передаче сигналов GPCR

  • Lefkowitz, R.J. Семь трансмембранных рецепторов: что-то старое, что-то новое. Acta Physiol. (Oxf.) 190 , 9–19 (2007).

    Артикул КАС Google ученый

  • Вилардага, Дж. П., Бунеманн, М., Красель, К., Кастро, М. и Лозе, М. Дж. Измерение миллисекундного переключения активации рецепторов, связанных с G-белком, в живых клетках. Нац. Биотехнолог. 21 , 807–812 (2003).

    Артикул КАС Google ученый

  • Николаев В.О., Хоффманн, С., Бунеманн, М., Лозе, М.Дж. и Вилардага, Дж.П. Молекулярные основы частичного агонизма нейротрансмиттера а2А-адренергического рецептора и гетеротримера Gi-белка. Дж. Биол. хим. 281 , 24506–24511 (2006 г.).

    Артикул КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Lohse, M.J. et al. Оптические методы для анализа активации и передачи сигналов рецепторов, связанных с G-белком, в реальном времени. Trends Pharmacol. науч. 29 , 159–165 (2008).

    Артикул КАС Google ученый

  • Вилардага, Дж.П., Ромеро, Г., Файнштейн, Т.Н. и Вехби, В.Л. Кинетика и динамика в сигнальном каскаде рецептора, связанного с G-белком. Методы Фермент. 522 , 337–363 (2013).

    Артикул КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Фарахбахш З.Т., Хидег, К. и Хаббелл, В.Л. Фотоактивированные конформационные изменения в родопсине: исследование спиновой метки с временным разрешением. Наука 262 , 1416–1419 (1993).

    Артикул КАС Google ученый

  • Hoffmann, C. et al. Подход FRET на основе FlAsH для определения активации рецептора, связанного с G-белком, в живых клетках. Нац. Методы 2 , 171–176 (2005).

    Артикул КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Феррандон, С.и другие. Устойчивая продукция циклического АМФ за счет эндоцитоза рецепторов паратиреоидного гормона. Нац. хим. биол. 5 , 734–742 (2009).

    Артикул КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Хайн, П., Франк, М., Хоффманн, К., Лозе, М.Дж. и Бунеманн, М. Динамика связывания рецептора/G-белка в живых клетках. EMBO J. 24 , 4106–4114 (2005).

    Артикул КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Бюнеманн, М., Frank, M. & Lohse, MJ Активация белка Gi в интактных клетках включает перестройку субъединиц, а не диссоциацию. Проц. Натл. акад. науч. США 100 , 16077–16082 (2003 г.).

    Артикул КАС Google ученый

  • Galés, C. et al. Исследование структурных перестроек, вызванных активацией, в предварительно собранных комплексах рецептор-G-белок. Нац. Структура Мол. биол. 13 , 778–786 (2006).

    Артикул КАС Google ученый

  • Gales, C. et al. Мониторинг взаимодействия рецепторов и G-белков в живых клетках в режиме реального времени. Нац. Методы 2 , 177–184 (2005).

    Артикул КАС Google ученый

  • Вилардага, Дж. П. и др. GPCR и G-белки: эффективность и активация лекарств в живых клетках. Мол. Эндокринол. 23 , 590–599 (2009).

    Артикул КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Ламберт Н.А. Диссоциация гетеротримерных G-белков в клетках. Науч. Сигнал. 1 , ред. 5 (2008 г.).

    Артикул Google ученый

  • Бенович, Дж.Л., Майор, Ф.младший, Сомерс, Р.Л., Кэрон, М.Г. и Лефковиц, Р.Дж. Светозависимое фосфорилирование родопсина киназой β-адренорецепторов. Природа 321 , 869–872 (1986).

    Артикул КАС Google ученый

  • Гудман О.Б. младший и др. b-аррестин действует как адаптер клатрина при эндоцитозе β2-адренорецептора. Природа 383 , 447–450 (1996).

    Артикул КАС Google ученый

  • Lohse, M.J., Nuber, S. & Hoffmann, C. Методы резонансной передачи энергии флуоресценции/биолюминесценции для изучения активации и передачи сигналов рецепторов, связанных с G-белком. Фармакол. 64 , 299–336 (2012).

    КАС Статья Google ученый

  • Калебиро, Д. и др. Постоянные сигналы цАМФ, запускаемые интернализованными рецепторами, связанными с G-белком. PLoS Биол. 7 , e1000172 (2009 г.).

    Артикул КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Мюллерсхаузен, Ф.и другие. Постоянная передача сигналов, индуцированная FTY720-фосфатом, опосредуется интернализованными рецепторами S1P1. Нац. хим. биол. 5 , 428–434 (2009).

    Артикул КАС Google ученый

  • Куна Р.С. и другие. Генерация эндосомального цАМФ, опосредованная рецептором глюкагоноподобного пептида-1, способствует стимулированной глюкозой секреции инсулина в β-клетках поджелудочной железы. утра. Дж. Физиол. Эндокринол. Метаб. 305 , E161–E170 (2013 г.).

    Артикул КАС Google ученый

  • Merriam, L.A. et al. Интернализация рецептора аденилатциклазы 1 гипофиза и эндосомальная передача сигналов опосредуют индуцированное полипептидом, активирующим аденилатциклазу гипофиза, повышение возбудимости сердечных нейронов морской свинки. J. Neurosci. 33 , 4614–4622 (2013).

    Артикул КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Файнштейн, Т.Н. и др. Неканонический контроль передачи сигналов рецептора вазопрессина 2 типа с помощью ретромера и аррестина. Дж. Биол. хим. 288 , 27849–27860 (2013).

    Артикул КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Ираннежад, Р. и др. Конформационные биосенсоры выявляют передачу сигналов GPCR от эндосом. Природа 495 , 534–538 (2013).

    Артикул КАС Google ученый

  • Котовски С.J., Hopf, FW, Seif, T., Bonci, A. & von Zastrow, M. Эндоцитоз способствует быстрой дофаминергической передаче сигналов. Нейрон 71 , 278–290 (2011).

    Артикул КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Латтрелл, Л. М. Мини-обзор: Больше, чем просто молоток: «предвзятость» лигандов и фармацевтические открытия. Мол. Эндокринол. 28 , 281–294 (2014).

    Артикул КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Ираннеджад, Р., Котовский, С.Дж. и фон Застроу, М. Изучение сигнальных последствий трафика GPCR в эндоцитарном пути. Методы Фермент. 535 , 403–418 (2014).

    Артикул КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • фон Застров, М. и Уильямс, Дж.Т. Модулирование нейромодуляции за счет движения рецепторной мембраны в эндоцитарном пути. Нейрон 76 , 22–32 (2012).

    Артикул КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Steyaert, J. & Kobilka, B.K. Нанотела стабилизируют конформационные состояния рецептора, связанного с G-белком. Курс. мнение Структура биол. 21 , 567–572 (2011).

    Артикул КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Перри, С.Дж. и другие. Направление деградации циклического АМФ на β2-адренорецепторы с помощью β-аррестинов. Наука 298 , 834–836 (2002).

    Артикул КАС Google ученый

  • Гануни, П., Стенхейс, Дж.Дж., Фарренс, Д.Л. и Кобилка Б.К. Агонист-индуцированные конформационные изменения в связывающем G-белок домене β2-адренорецептора. Проц. Натл. акад. науч. США 98 , 5997–6002 (2001).

    Артикул КАС Google ученый

  • Гануни, П.и другие. Функционально разные агонисты индуцируют разные конформации в связывающем G-белке домене β2-адренергического рецептора. Дж. Биол. хим. 276 , 24433–24436 (2001).

    Артикул КАС Google ученый

  • Кларк, В.П. Что на обед в конформационной столовой? Мол. Фармакол. 67 , 1819–1821 (2005).

    Артикул КАС Google ученый

  • Вилардага, Дж.П., Штайнмейер Р., Хармс Г. С. и Лозе М. Дж. Молекулярные основы обратного агонизма в рецепторе, связанном с G-белком. Нац. хим. биол. 1 , 25–28 (2005).

    Артикул КАС Google ученый

  • Вилардага, Дж. П. и др. Конформационные перекрестные помехи между α2A-адренергическими и м-опиоидными рецепторами контролируют передачу сигналов клетками. Нац. хим. биол. 4 , 126–131 (2008).

    Артикул КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Дин Т., Вилардага, Дж.П., Поттс, Дж.Т. младший и Гарделла, Т.Дж. Измененная селективность паратиреоидного гормона (ПТГ) и белка, родственного ПТГ (ПТГрП), для различных конформаций рецептора ПТГ/ПТГрП. Мол. Эндокринол. 22 , 156–166 (2008).

    Артикул КАС Google ученый

  • Okazaki, M. et al. Длительная передача сигналов на рецепторе паратиреоидного гормона пептидными лигандами, нацеленными на специфическую конформацию рецептора. Проц. Натл. акад. науч. США 105 , 16525–16530 (2008 г.).

    Артикул Google ученый

  • De Lean, A., Stadel, J. & Lefkowitz, R. Модель тройного комплекса объясняет агонист-специфические связывающие свойства b-адренергического рецептора, связанного с аденилатциклазой. Дж. Биол. хим. 255 , 7108–7117 (1980).

    КАС Google ученый

  • Джейкобс, Дж.В., Кемпер Б., Найл Х.Д., Хабенер Дж.Ф. и Поттс Дж.Т. Младший. Структурный анализ человеческого пропаратиреоидного гормона с помощью нового подхода микросеквенирования. Природа 249 , 155–157 (1974).

    Артикул КАС Google ученый

  • Гамильтон, Дж.В. и другие. N-концевая аминокислотная последовательность бычьего пропаратиреоидного гормона. Проц. Натл. акад. науч. США 71 , 653–656 (1974).

    Артикул КАС Google ученый

  • Сува, Л.Дж. и др. Белок, связанный с гормоном паращитовидной железы, участвующий в злокачественной гиперкальциемии: клонирование и экспрессия. Наука 237 , 893–896 (1987).

    Артикул КАС Google ученый

  • Moseley, J.M. et al. Белок, родственный паратиреоидному гормону, очищенный из линии клеток рака легкого человека. Проц. Натл. акад. науч. США 84 , 5048–5052 (1987).

    Артикул КАС Google ученый

  • Маэда, А.и другие. Критическая роль фосфорилирования рецептора-1 паратиреоидного гормона (ПТГ) в регуляции острых реакций на ПТГ. Проц. Натл. акад. науч. США 110 , 5864–5869 (2013).

    Артикул КАС Google ученый

  • Кастро М., Николаев В.О., Палм Д., Лозе М.Дж. и Вилардага Дж.П. Включение рецептора паратиреоидного гормона с помощью двухэтапного механизма связывания паратиреоидного гормона. Проц. Натл. акад.науч. США 102 , 16084–16089 (2005 г.).

    Артикул КАС Google ученый

  • Соркин А. и фон Застров М. Эндоцитоз и передача сигналов: переплетение молекулярных сетей. Нац. Преподобный Мол. Клеточная биол. 10 , 609–622 (2009).

    Артикул КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Хоффманн Р., Бейли Г.С., Маккензи С.Дж., Ярвуд С.Дж. & Houslay, MD. MAP-киназа ERK2 ингибирует циклическую AMP-специфическую фосфодиэстеразу HSPDE4D3, фосфорилируя ее по Ser579. EMBO J. 18 , 893–903 (1999).

    Артикул КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Файнштейн Т.Н. и другие. Ретромер прекращает выработку цАМФ интернализованными рецепторами ПТГ. Нац. хим. биол. 7 , 278–284 (2011).

    Артикул КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Коллинз, Б.М. и другие. Структура Vps26B и картирование его взаимодействия с ретромерным белковым комплексом. Traffic 9 , 366–379 (2008).

    Артикул КАС Google ученый

  • Коллинз, Б.М. Структура и функция ретромерного белкового комплекса. Traffic 9 , 1811–1822 (2008 г.).

    Артикул КАС Google ученый

  • Бонифачино, Дж.С. и Рохас, Р. Ретроградный транспорт от эндосом к сети транс-Гольджи. Нац. Преподобный Мол. Клеточная биол. 7 , 568–579 (2006).

    Артикул КАС Google ученый

  • Гидон, А. и др. Передача сигналов эндосомального GPCR отключена действием отрицательной обратной связи PKA и v-ATPase. Нац. хим. биол. 10 , 707–709 (2014).

    Артикул КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Обри, Л., Гетта, Д. и Кляйн, Г. Арсетиновая складка: вариации на тему. Курс. Геномика 10 , 133–142 (2009).

    Артикул КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Ши, Х., Рохас Р., Бонифачино Дж.С. и Херли, Дж. Х. Субъединица ретромера Vps26 имеет аррестиновую складку и связывается с Vps35 через свой С-концевой домен. Нац. Структура Мол. биол. 13 , 540–548 (2006).

    Артикул КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Йерро, А. и др. Функциональная архитектура комплекса распознавания грузов «Ретромер». Природа 449 , 1063–1067 (2007).

    Артикул КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Lohse, M.J. et al. Рецептор-специфическая десенсибилизация очищенными белками. Киназная зависимость и рецепторная специфичность β-аррестина и аррестина в системах β2-адренорецепторов и родопсина. Дж. Биол. хим. 267 , 8558–8564 (1992).

    КАС пабмед Google ученый

  • Лозе, М.Дж., Бенович Дж.Л., Кодина Дж., Кэрон М.Г. и Лефковиц, Р.Дж. β-аррестин: белок, регулирующий функцию β-адренорецепторов. Наука 248 , 1547–1550 (1990).

    Артикул КАС Google ученый

  • Пиппиг, С. и др. Сверхэкспрессия β-аррестина и киназы β-адренорецепторов усиливает десенсибилизацию β2-адренорецепторов. Дж. Биол. хим. 268 , 3201–3208 (1993).

    КАС пабмед Google ученый

  • Крупник, Дж.Г., Гудман, О.Б. младший, Кин, Дж.Х. и Бенович, Дж. Л. Взаимодействие аррестина и клатрина. Локализация клатрин-связывающего домена невизуальных аррестинов на карбокси-конце. Дж. Биол. хим. 272 , 15011–15016 (1997).

    Артикул КАС Google ученый

  • Вилардага, Дж.П. и др. Детерминанты интернализации рецептора паратиреоидного гормона по-разному регулируют ассоциацию β-аррестина/рецептора. Дж. Биол. хим. 277 , 8121–8129 (2002 г.).

    Артикул КАС Google ученый

  • Малец Н., Бамбино Т., Бенчик М. и Ниссенсон Р.А. Идентификация сайтов фосфорилирования в рецепторе паратиреоидного гормона, связанном с G-белком. Фосфорилирование рецептора не требуется для индуцированной агонистом интернализации. Мол. Эндокринол. 12 , 1846–1856 (1998).

    Артикул КАС Google ученый

  • Махон, М.Дж., Боначчи, Т.М., Дивиети, П. и Смрчка, А.В. Сайт стыковки субъединиц bg G-белка на рецепторе паратиреоидного гормона 1 поддерживает передачу сигналов через несколько путей. Мол. Эндокринол. 20 , 136–146 (2006).

    Артикул КАС Google ученый

  • Вехби, В.Л. и др. Неканоническая передача сигналов GPCR, возникающая из комплекса рецептор ПТГ-аррестин-Gbg. Проц. Натл. акад. науч. США 110 , 1530–1535 (2013).

    Артикул пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Винер, К.К. и другие. Заместительная терапия синтетическим гормоном паращитовидной железы человека 1–34: рандомизированное перекрестное исследование, сравнивающее помпу с инъекциями при лечении хронического гипопаратиреоза. Дж.клин. Эндокринол. Метаб. 97 , 391–399 (2012).

    Артикул КАС Google ученый

  • Национальный центр развития трансляционных наук. Аналоги паратгормона длительного действия для лечения гипопаратиреоза. http://www.ncats.nih.gov/research/reengineering/bridgs/projects/parathyroid.html (2014 г.).

  • von Zastrow, M. & Bourne, HR в Basic and Clinical Pharmacology (eds.Катцунг, Б.Г., Мастерс, С.Б. и Тревор, А.Дж.) (McGraw Hill, 2009).

    Google ученый

  • Вилардага, Дж.П., Гарделла, Т.Дж., Вехби, В.Л. и Файнштейн, Т.Н. Неканоническая передача сигналов рецептора ПТГ. Trends Pharmacol. науч. 33 , 423–431 (2012).

    Артикул КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • CANDLES, анализ для мониторинга индуцированного GPCR образования цАМФ в клеточных культурах | Cell Communication and Signaling

  • Lagerstrom MC, Schioth HB: Структурное разнообразие рецепторов, связанных с G-белком, и значение для открытия лекарств.Nat Rev Drug Discov. 2008, 7: 339-357. 10.1038/nrd2518.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Fredriksson R, Lagerstrom MC, Lundin LG, Schioth HB: Связанные с G-белком рецепторы в геноме человека образуют пять основных семейств. Филогенетический анализ, паралогонные группы и отпечатки пальцев. Мол Фармакол. 2003, 63: 1256-1272. 10,1124/моль.63,6,1256.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Сато М., Блумер Дж. Б., Саймон В., Ланье С. М.: Вспомогательные белки для G-белков: партнеры в передаче сигналов.Annu Rev Pharmacol Toxicol. 2006, 46: 151-187. 10.1146/annurev.pharmtox.46.120604.141115.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Wettschureck N, Offermanns S: G-белки млекопитающих и их функции, специфичные для типов клеток. Physiol Rev. 2005, 85: 1159-1204. 10.1152/физрев.00003.2005.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Tilley DG: Зависимые от G-белка и независимые от G-белка сигнальные пути и их влияние на сердечную функцию.Цирк рез. 2011, 109: 217-230. 10.1161/ЦИРКРЕСАХА.110.231225.

    ПабМед КАС ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Gsandtner I, Charalambous C, Stefan E, Ogris E, Freissmuth M, Zezula J: Heterotrimeric G-белок-независимая передача сигналов рецептора, связанного с G-белком. Прямое связывание ARNO/цитогезина-2 с карбоксильным концом аденозинового рецептора A2A необходимо для устойчивой активации киназного пути ERK/MAP.Дж. Биол. Хим. 2005, 280: 31898-31905. 10.1074/jbc.M506515200.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Сунахара Р.К., Дессауэр К.В., Гилман А.Г.: Сложность и разнообразие аденилатциклаз млекопитающих. Annu Rev Pharmacol Toxicol. 1996, 36: 461-480. 10.1146/аннурев.па.36.040196.002333.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Chung KY, Rasmussen SG, Liu T, Li S, DeVree BT, Chae PS, Calinski D, Kobilka BK, Woods VL Jr, Sunahara RK: конформационные изменения G-белка G, индуцированные бета2-адренергическим рецептором.Природа. 2011, 477: 611-615. 10.1038/природа10488.

    ПабМед КАС ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Расмуссен С.Г., ДеВри Б.Т., Зоу Ю., Крузе А.С., Чанг К.И., Кобилка Т.С., Тиан Ф.С., Че П.С., Пардон Э., Калински Д., Мэтисен Д.М., Шах С.Т., Лайонс Д.А., Кэффри М., Геллман С.Х., Стейарт J, Skiniotis G, Weis WI, Sunahara RK, Kobilka BK: Кристаллическая структура комплекса бета2-адренергический рецептор-Gs-белок. Природа. 2011, 477: 549-555.10.1038/природа10361.

    ПабМед КАС ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Катрич В., Черезов В., Стивенс Р.С.: Структурно-функция надсемейства рецепторов, связанных с G-белком. Annu Rev Pharmacol Toxicol. 2013, 53: 531-556. 10.1146/annurev-pharmtox-032112-135923.

    ПабМед КАС ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Николс В.В.: Хромосомные аномалии, вызванные вирусом.Анну Рев Микробиол. 1970, 24: 479-500. 10.1146/аннурев.ми.24.100170.002403.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Reddel RR, Ke Y, Gerwin BI, McMenamin MG, Lechner JF, Su RT, Brash DE, Park JB, Rhim JS, Harris CC: Трансформация клеток бронхиального эпителия человека путем инфицирования гибридом SV40 или аденовируса-12 SV40 вируса или трансфекции путем соосаждения фосфатом стронция с плазмидой, содержащей гены ранней области SV40.Рак рез. 1988, 48: 1904-1909.

    ПабМед КАС Google ученый

  • Jin Y, Mertens F, Mandahl N, Heim S, Olegard C, Wennerberg J, Biorklund A, Mitelman F: Хромосомные аномалии в восьмидесяти трех плоскоклеточных карциномах головы и шеи: влияние условий культивирования на кариотипический образец. Рак рез. 1993, 53: 2140-2146.

    ПабМед КАС Google ученый

  • Дегорс Ф., Кард А., Сох С., Тринкет Э., Кнапик Г.П., Се Б.: HTRF: технология, разработанная для открытия новых лекарств – обзор теоретических аспектов и последних применений.Курр Хим Геномика. 2009, 3: 22-32. 10.2174/18753973000022.

    ПабМед КАС ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Bradley J, McLoughlin D: Использование анализа cAMPII DiscoverRx Hit hunter для прямого измерения цАМФ в Gs и Gi GPCR. Методы Мол Биол. 2009, 552: 171-179. 10.1007/978-1-60327-317-6_12.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Габриэль Д., Вернье М., Пфайфер М.Дж., Дасен Б., Тенайлон Л., Бухелаль Р.: Высокопроизводительные технологии скрининга для прямого измерения циклического AMP.Assay Drug Dev Technol. 2003, 1: 291-303. 10.1089/15406580360545107.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Брукер Г., Терасаки В.Л., Прайс М.Г.: Gammaflow: полностью автоматизированная система радиоиммуноанализа. Наука. 1976, 194: 270-276. 10.1126/наук.184530.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Штайнер А.Л., Кипнис Д.М., Утигер Р., Паркер С.: Радиоиммуноанализ для измерения аденозин-3’,5’-циклического фосфата.Proc Natl Acad Sci U S A. 1969, 64: 367-373. 10.1073/пнас.64.1.367.

    ПабМед КАС ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Willoughby D, Cooper DM: Визуализация динамики цАМФ в живых клетках. Нат Методы. 2008, 5: 29-36. 10.1038/nmeth2135.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Taylor SS, Yang J, Wu J, Haste NM, Radzio-Andzelm E, Anand G: PKA: портрет динамики протеинкиназы.Биохим Биофиз Акта. 2004, 1697: 259-269. 10.1016/j.bbapap.2003.11.029.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Gloerich M, Bos JL: Epac: определение нового механизма действия цАМФ. Annu Rev Pharmacol Toxicol. 2010, 50: 355-375. 10.1146/annurev.pharmtox.010909.105714.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Klarenbeek JB, Goedhart J, Hink MA, Gadella TW, Jalink K: Датчик цАМФ на основе mTurquoise для FLIM и логометрических показаний имеет улучшенный динамический диапазон.ПЛОС Один. 2011, 6: e19170-10.1371/journal.pone.0019170.

    ПабМед КАС ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Mongillo M, McSorley T, Evellin S, Sood A, Lissandron V, Terrin A, Huston E, Hannawacker A, Lohse MJ, Pozzan T, Houslay MD, Zaccolo M: Анализ динамики цАМФ на основе переноса энергии флуоресцентного резонанса в живых неонатальных крысиных сердечных миоцитах обнаруживаются отчетливые функции компартментализованных фосфодиэстераз.Цирк рез. 2004, 95: 67-75. 10.1161/01.РЕЗ.0000134629.84732.11.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Ponsioen B, Zhao J, Riedl J, Zwartkruis F, van der Krogt G, Zaccolo M, Moolenaar WH, Bos JL, Jalink K: Обнаружение цАМФ-индуцированной активации Epac путем флуоресцентного резонансного переноса энергии: Epac как новый цАМФ индикатор. EMBO Rep. 2004, 5: 1176-1180. 10.1038/сж.эмбор.7400290.

    ПабМед КАС ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Zaccolo M, Pozzan T: Дискретные микродомены с высокой концентрацией цАМФ в стимулированных сердечных миоцитах новорожденных крыс.Наука. 2002, 295: 1711-1715. 10.1126/научн.1069982.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Николаев В.О., Бунеманн М., Хайн Л., Ханнавакер А., Лозе М.Дж.: Новые сенсоры одноцепочечного цАМФ для индуцированного рецептором распространения сигнала. Дж. Биол. Хим. 2004, 279: 37215-37218. 10.1074/jbc.C400302200.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Zhang J, Ma Y, Taylor SS, Tsien RY: Генетически закодированные репортеры активности протеинкиназы A обнаруживают влияние привязки субстрата.Proc Natl Acad Sci U S A. 2001, 98: 14997-15002. 10.1073/пнас.211566798.

    ПабМед КАС ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Zaccolo M, De Giorgi F, Cho CY, Feng L, Knapp T, Negulescu PA, Taylor SS, Tsien RY, Pozzan T: генетически кодируемый флуоресцентный индикатор циклического AMP в живых клетках. Nat Cell Biol. 2000, 2: 25-29. 10.1038/71345.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Цзян Л.И., Коллинз Дж., Дэвис Р., Лин К.М., ДеКэмп Д., Роуч Т., Сюэ Р., Ребрес Р.А., Росс Э.М., Тауссиг Р., Фрейзер И., Штернвейс ПК: Использование датчика cAMP BRET для характеристики романа регуляция цАМФ путем сфингозин-1-фосфата/G13.Дж. Биол. Хим. 2007, 282: 10576-10584. 10.1074/jbc.M609695200.

    ПабМед КАС ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Принц А., Дискар М., Эрлбрух А., Херберг Ф.В.: Новые изотип-специфические датчики взаимодействия субъединиц протеинкиназы А на основе резонансного переноса энергии биолюминесценции (BRET). Сотовый сигнал. 2006, 18: 1616-1625. 10.1016/j.cellsig.2006.01.013.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Бинковски Б.Ф., Батлер Б.Л., Стеча П.Ф., Эггерс К.Т., Отто П., Циммерман К., Видугирис Г., Вуд М.Г., Энселл Л.П., Фан Ф., Вуд К.В.: Люминесцентный биосенсор с увеличенным динамическим диапазоном для внутриклеточного цАМФ.ACS Chem Biol. 2011, 6: 1193-1197. 10.1021/cb200248h.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Warrier S, Belevych AE, Ruse M, Eckert RL, Zaccolo M, Pozzan T, Harvey RD: Вызванные бета-адренергическими и мускариновыми рецепторами изменения активности цАМФ во взрослых сердечных миоцитах, обнаруженные с помощью биосенсора на основе FRET. Am J Physiol Cell Physiol. 2005, 289: C455-C461. 10.1152/ajpcell.00058.2005.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Сосинский Г.Э., Николсон Б.Дж.: Структурная организация каналов щелевого соединения.Биохим Биофиз Акта. 2005, 1711: 99-125. 10.1016/j.bbamem.2005.04.001.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Herve JC, Derangeon M, Sarrouilhe D, Giepmans BN, Bourmeyster N: Каналы щелевых соединений являются частью мультипротеиновых комплексов. Биохим Биофиз Акта. 1818, 2012: 1844-1865.

    Google ученый

  • Гипманс Б.Н. Щелевые соединения и белки, взаимодействующие с коннексином.Кардиовасц Рез. 2004, 62: 233-245. 10.1016/j.cardiores.2003.12.009.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Беднер П., Ниссен Х., Одерматт Б., Виллеке К., Харц Х.: Метод определения относительной проницаемости цАМФ каналов коннексина. Разрешение ячейки опыта. 2003, 291: 25-35. 10.1016/S0014-4827(03)00323-9.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Лоуренс Т.С., Бирс В.Х., Гилула Н.Б.: Передача гормональной стимуляции посредством межклеточной коммуникации.Природа. 1978, 272: 501-506. 10.1038/272501а0.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Kam Y, Kim DY, Koo SK, Joe CO: Перенос вторичных мессенджеров через коннексин 43 каналов с щелевым соединением, воссозданный в липосомах. Биохим Биофиз Акта. 1998, 1372: 384-388. 10.1016/S0005-2736(98)00075-3.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Bevans CG, Kordel M, Rhee SK, Harris AL: Изоформный состав каналов коннексина определяет селективность среди вторичных мессенджеров и незаряженных молекул.Дж. Биол. Хим. 1998, 273: 2808-2816. 10.1074/jbc.273.5.2808.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Ponsioen B, van Zeijl L, Moolenaar WH, Jalink K: Прямое измерение диффузии циклического AMP и передачи сигналов через каналы щелевого соединения коннексина43. Разрешение ячейки опыта. 2007, 313: 415-423. 10.1016/j.yexcr.2006.10.029.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Kananen K, Markkula M, Rainio E, Su JG, Hsueh AJ, Huhtaniemi IT: Онкогенез гонад у трансгенных мышей, несущих промотор мышиного ингибина альфа-субъединицы/слитый ген Т-антигена вируса обезьяны: характеристика опухолей яичников и установление линий клеток гранулезы, чувствительных к гонадотропинам.Мол Эндокринол. 1995, 9: 616-627.

    ПабМед КАС Google ученый

  • Лю Дж., Сирагам В., Чен Дж., Фридман М.Д., Гамильтон Р.М., Сунь Й.: Высокопроизводительное измерение межклеточной связи через щелевые соединения. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 2014, 306: h2708-h2713. 10.1152/ajpheart.00110.2014.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Дэвидсон Дж. С., Баумгартен И. М.: Производные глицирретиновой кислоты: новый класс ингибиторов межклеточной коммуникации через щелевые соединения.Структурно-деятельностные отношения. J Pharmacol Exp Ther. 1988, 246: 1104-1107.

    ПабМед КАС Google ученый

  • Spray DC, Rozental R, Srinivas M: Перспективы рациональной разработки фармакологических блокаторов каналов щелевых соединений. Curr Цели наркотиков. 2002, 3: 455-464. 10.2174/1389450023347353.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Кейпс-Дэвис А., Теодосопулос Г., Аткин И., Дрекслер Х.Г., Кохара А., Маклауд Р.А., Мастерс Дж.Р., Накамура Ю., Рейд Ю.А., Реддел Р.Р., Фрешни Р.И.: Проверьте свои культуры! Список перекрестно загрязненных или ошибочно идентифицированных клеточных линий.Инт Джей Рак. 2010, 127: 1-8. 10.1002/ijc.25242.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Bjorkblom B, Ostman N, Hongisto V, Komarovski V, Filen JJ, Nyman TA, Kallunki T, Courtney MJ, Coffey ET: Конститутивно активная цитоплазматическая N-концевая киназа c-Jun 1 является доминирующим регулятором дендритной архитектуры: роль ассоциированного с микротрубочками белка 2 как эффектора. Дж. Нейроски. 2005, 25: 6350-6361. 10.1523/JNEUROSCI.1517-05.2005.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Burkart AD, Mukherjee A, Mayo KE: Механизм репрессии гена альфа-субъединицы ингибина индуцируемым ранним репрессором 3’,5’-циклического аденозинмонофосфата. Мол Эндокринол. 2006, 20: 584-597. 10.1210/м.2005-0204.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Fort AG, Murray JW, Dandachi N, Davidson MW, Dermietzel R, Wolkoff AW, Spray DC: In vitro подвижность коннексиновых везикул печени вдоль микротрубочек использует кинезиновые моторы.Дж. Биол. Хим. 2011, 286: 22875-22885. 10.1074/jbc.M111.219709.

    ПабМед КАС ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Техническое руководство по анализу цАМФ GloSensor™ [], [https://www.promega.com/~/media/files/resources/protocols/technical%20manuals/0/glosensor%20camp%20assay%20protocol.pdf]

  • Дефектная генерация цАМФ лежит в основе чувствительности нейронов ЦНС к нейрофиброматозу-1.В этом отчете мы демонстрируем уникальную уязвимость нейронов ЦНС, но не нейронов периферической нервной системы (ПНС), к снижению экспрессии гена

    Nf1 . В отличие от нейронов ганглиев задних корешков, Nf1 гетерозиготных ( Nf1 +/-) нейронов гиппокампа и ганглиозных клеток сетчатки (RGC) имеют уменьшенные площади конусов роста и длину нейритов, а также повышенный апоптоз по сравнению с их аналогами дикого типа. Эти аномальные Nf1 +/- фенотипы нейронов ЦНС не отражают гиперактивацию пути Ras, а скорее являются результатом нарушения нейрофибромин-опосредованной генерации цАМФ.В связи с этим повышение уровня цАМФ с помощью лечения форсколином или ролипрамом, но не ингибирование MEK (MAP kinase kinase) или PI3-K (фосфатидилинозитол 3-киназа), обращает эти аномалии в уровни дикого типа in vitro . Кроме того, Nf1 +/- ЦНС, но не ПНС, нейроны обнаруживают повышенный апоптоз в ответ на эксайтотоксический или окислительный стресс in vitro . Поскольку у детей с NF1-ассоциированными глиомами зрительного нерва часто развивается потеря зрения, а у Nf1 генно-инженерных мышей с глиомой зрительного нерва наблюдается апоптоз RGC-нейронов in vivo , мы далее демонстрируем, что апоптоз RGC, возникающий в результате глиомы зрительного нерва у Nf1 генно-инженерных мышей, ослабляется. при лечении ролипрамом in vivo .Подобно индуцированному глиомой зрительного нерва апоптозу RGC, повышенная гибель нейронов RGC у мышей Nf1 +/- после повреждения зрительного нерва также ослабляется обработкой рольпрамом in vivo . Вместе эти результаты устанавливают отличительную роль нейрофибромина в нейронах ЦНС в отношении уязвимости к травмам, определяют специфический для ЦНС внутриклеточный сигнальный путь нейрофибромина, ответственный за выживание нейронов, и закладывают основу для будущих нейропротективных подходов к лечению глиомы.

    Введение

    Нейрофиброматоз типа 1 (NF1) является одним из наиболее распространенных наследственных онкологических синдромов, поражающих нервную систему. Дети с NF1 рождаются с одной мутированной (нефункциональной) и одной функциональной копией гена NF1 в каждой клетке их тела (гетерозиготность NF1 ), но у них после соматических заболеваний развиваются низкодифференцированные опухоли центральной и периферической нервной системы (ПНС). инактивация оставшегося функционального аллеля NF1 в специфических клетках (например,г., глиальные клетки). В ЦНС глиальные новообразования, поражающие зрительный нерв (ЗН)/хиазму (глиома зрительного нерва), возникают у 15% детей с НФ1 (Listernick et al., 1997). Почти половина детей с NF1-ассоциированными глиомами зрительного нерва имеют нарушения зрения (Listernic et al., 1997), и лишь немногие восстанавливают зрение после лечения (Dalla Via et al., 2007). Кроме того, 50–70% детей с NF1 проявляют трудности в обучении, которые ограничивают успеваемость в школе (Eliason, 1986; North et al., 1995, 1997; Ozonoff, 1999; Hyman et al., 2005). Для моделирования этих нарушений обучаемости в предыдущих исследованиях использовали Nf1 генно-инженерных мышей (GEM), чтобы продемонстрировать, что нарушения обучения и памяти, наблюдаемые у Nf1 +/- мышей, являются результатом гетерозиготности Nf1 в нейронах, а не в глиальных клетках (Costa et al. al., 2002; Cui Y. et al., 2008).

    Роль белка NF1 , нейрофибромина, в функции нейронов изучалась в первую очередь на нейронах ПНС. Пионерские исследования, проведенные Парада и его коллегами, впервые продемонстрировали, что полная инактивация Nf1 в клетках периферических ганглиев приводит к относительной независимости от нейротрофинов, что приводит к несоответствующей (увеличенной) выживаемости нейронов (Vogel et al., 1995). Напротив, предыдущие исследования нашей лаборатории, посвященные дифференцировке нейронов и глии из нейральных стволовых клеток (НСК) in vitro и in vivo продемонстрировали, что нейронов Nf1 -/- обнаруживали уменьшение длины нейритов, что приводило к уменьшению вторичной соматосенсорной коры. толщина (Hegedus et al., 2007). Однако, в отличие от нейронов ПНС, чья относительная независимость от нейротрофинов является результатом гиперактивации Ras, НСК, экспрессирующие активированный аллель Ras, образуют нейроны с нормальной длиной нейритов in vitro и in vivo , что позволяет предположить, что гиперактивация Ras не была ответственна за этот аномальный фенотип нейронов в Nf1 -дефицитные клетки.

    Цель настоящего исследования состояла в том, чтобы выявить очевидные различия между уязвимостью нейронов центральной и периферической систем к изменениям дозы гена Nf1 и определить молекулярный механизм, лежащий в основе этих различий. Здесь мы показываем, что нейроны ПНС не подвержены значительному влиянию гетерозиготности Nf1 in vitro , тогда как Nf1 +/- нейроны из гиппокампа или сетчатки имеют значительно более короткую длину нейритов и площади конусов роста, а также повышенный апоптоз. in vitro .Далее мы демонстрируем, что эти фенотипы в нейронах ЦНС являются результатом нарушения нейрофиброминовой регуляции цАМФ. Наконец, мы использовали штамм GEM оптической глиомы Nf1 +/- GFAP CKO (условно нокаутный), чтобы показать, что коррекция дефекта передачи сигналов цАМФ, возникающего в результате снижения функции нейрофибромина в нейронах сетчатки, улучшает апоптоз ганглиозных клеток сетчатки (RGC). связанные с образованием опухоли in vivo . Вместе эти результаты демонстрируют, что нейроны ЦНС и ПНС по-разному чувствительны к эффектам гетерозиготности Nf1 , и делают цАМФ важной мишенью для будущей разработки терапевтических препаратов, направленных на снижение дисфункции нейронов ЦНС у людей с NF1.

    Результаты

    Nf1 гетерозиготность приводит к нарушению морфологии и выживаемости нейронов гиппокампа

    Чтобы определить влияние сниженной экспрессии Nf1 на нейроны ЦНС, мы использовали диссоциированные культуры нейронов гиппокампа эмбрионов мышей примерно 13,5 дня (E13.5) эмбрионального возраста. Каждая культуральная чашка была получена из одного эмбриона, и исследователь не знал генотипа до тех пор, пока оценка не была завершена. Через 3 дня в культуре клетки фиксировали и метили нейронным маркером Tuj-1 и TUNEL для измерения апоптотической гибели клеток.Затем культуры оценивали по площади конуса роста, длине нейритов и гибели клеток. Удивительно, но площади конусов роста из Nf1 +/- нейронов гиппокампа были примерно на 40% меньше, чем у их аналогов WT ( p = 0,0001; N = 40) (рис. 1 A ). Учитывая важность конусов роста в обнаружении мишеней для нейронов во время развития и регенерации (Lankford et al., 1990), нейроны с уменьшенным распространением конусов роста могут также иметь ослабленные нейрональные процессы. Как и предполагалось, Nf1 +/- длина нейритов гиппокампа была на 25% короче, чем их аналоги WT ( p = 0.02; N = 47) (рис. 1 B ). Более того, Nf1 +/- нейронов гиппокампа также продемонстрировали повышенную гибель клеток in vitro по сравнению с нейронами дикого типа ( p = 0,05) (рис. 1 C ). В совокупности эти находки демонстрируют, что сниженная экспрессия нейрофибромина приводит к нарушению функции нейронов гиппокампа 92–175 in vitro 92–176 .

    Рисунок 1.

    Nf1 +/- нейроны гиппокампа имеют уменьшенные площади конусов роста, длину нейритов и выживаемость клеток in vitro . A , Nf1 +/- конусы роста нейронов гиппокампа (обозначены Tuj-1) меньше, чем их аналоги WT ( p = 0,0001; N = 40). Масштабная линейка, 50 мкм. B , Длина нейритов, идентифицированная иммуноокрашиванием Tuj-1, значительно короче в Nf1 +/- нейронах гиппокампа ( p = 0,02; N = 47). Масштабная линейка, 50 мкм. C , Nf1 +/- Нейроны гиппокампа демонстрируют большее количество меток TUNEL+ по сравнению с их аналогами WT ( p = 0.05). Столбики погрешностей указывают SEM. Звездочками отмечены статистически значимые различия (* p < 0,05, ** p < 0,01).

    Nf1 гетерозиготность оказывает минимальное влияние на функцию нейронов ПНС

    Предыдущее исследование показало, что полная инактивация Nf1 обеспечивает относительную независимую от трофических факторов выживаемость нейронов DRG и что гетерозиготность не влияет на выживаемость нейронов DRG с NGF или без него (Vogel et al., 1995).В свете влияния гетерозиготности Nf1 на нейроны ЦНС мы попытались определить, отражают ли наблюдаемые дефициты роста и выживания различия в чувствительности к дозе гена Nf1 в нейронах ЦНС и ПНС. Нейроны DRG были получены из тех же эмбрионов мышей ~ E13.5, которые использовались для создания вышеуказанных культур нейронов гиппокампа. Как и прежде, исследователь не знал генотипов до тех пор, пока не были собраны все данные. В отличие от нейронов гиппокампа, в нейронах Nf1 +/- DRG наблюдалось небольшое увеличение площади конусов роста по сравнению с их аналогами WT, что было противоположно тому, что мы наблюдали в нейронах гиппокампа ( p = 0.05; N = 40) (рис. 2 A ). Как и в предыдущих отчетах, не было различий в длине нейритов или апоптозе между нейронами Nf1 +/- и WT DRG (рис. 2 B , C). Эти результаты подтверждают более ранние исследования и демонстрируют поразительные различия в чувствительности к гетерозиготности Nf1 в популяциях нейронов ЦНС и ПНС.

    Рисунок 2.

    Nf1 +/- нейроны DRG имеют нормальные площади конусов роста, длину нейритов и выживаемость клеток in vitro . A , Nf1 +/- DRG конусы роста нейронов (обозначены Tuj-1) незначительно больше, чем их аналоги WT ( p = 0,0001; N = 40). B , Длины нейритов, идентифицированные Tuj-1, эквивалентны в нейронах WT и Nf1 +/- DRG ( N = 42). Масштабная линейка, 20 мкм. C , Nf1 +/- и нейроны WT DRG имеют эквивалентное количество нейронных клеток TUNEL+. Столбики погрешностей указывают SEM.Звездочки обозначают статистически значимое различие ( p < 0,05).

    Nf1 гетерозиготность приводит к нарушению морфологии и выживаемости нейронов RGC

    Чтобы подтвердить наше наблюдение, что гетерозиготность Nf1 в нейронах ЦНС приводит к аномальным фенотипам нейронов, мы затем решили исследовать другую популяцию нейронов ЦНС, имеющих отношение к детям с NF1. Мы решили изучить нейроны RGC на основании нашего обнаружения гибели нейронов слоя сетчатки в генетически модифицированной мышиной модели NF1-ассоциированной глиомы зрительного нерва (Hegedus et al., 2009). Для этих исследований мы использовали как диссоциированные культуры RGC, так и эксплантаты сетчатки с идентичными результатами. Культуры эксплантатов сетчатки мышей P5 содержали почти чистую (≥98%) популяцию нейронов RGC, как показано с использованием маркера CD90.2 RGC (дополнительный рисунок 1 A , доступный на www.jneurosci.org в качестве дополнительного материала) . Клетки фиксировали и окрашивали через 6 дней в культуре, а распространение конусов роста оценивали слепым способом, как и раньше.

    Как видно из нейронов гиппокампа, нейронов Nf1 +/- RGC имели на 57% меньшие конусы роста по сравнению с их аналогами WT ( p = 0.0001; N = 40) (рис. 3 A ). Длину нейритов оценивали в диссоциатных культурах, очищенных по сродству с Thy1.2 с помощью магнитных шариков: как и прежде, длина нейритов Nf1 +/- RGC была на 35% короче, чем у их аналогов WT ( p = 0,0001; N = 40). (Рис. 3 B ). Для оценки апоптотической гибели клеток эксплантаты сетчатки выращивали на слое астроцитов, чтобы облегчить миграцию RGC из эксплантата. Процент клеток TUNEL+, CD90.2+ был на 9% выше в Nf1 +/- по сравнению с нейронами WT RGC, независимо от статуса Nf1 астроцитов ( p = 0.05) (рис. 3 C ). В сочетании с результатами, полученными с нейронами гиппокампа и DRG, эти данные подтверждают, что нейроны ЦНС однозначно чувствительны к уменьшенной экспрессии гена Nf1 .

    Рисунок 3.

    Nf1 +/- RGCs демонстрируют уменьшенные площади конусов роста, длину нейритов и выживаемость клеток in vitro . A , Nf1 +/- Конусы роста нейронов RGC (обозначены Tuj-1) меньше, чем их аналоги WT ( p = 0.0001; N = 40). Масштабная линейка, 20 мкм. B , Nf1 +/- Длина нейритов RGC после магнитной сортировки клеток и иммуноокрашивания Tuj-1 значительно короче, чем у их аналогов WT ( p = 0,0001; N = 40). Масштабная линейка, 20 мкм. C , , , NF1 +/- Эксплуатации NF1 +/- Эксплуатация сетчатки выставляют больше неиспользуемых клеток тунля +, независимо от генотипа астроцитов ( P = 0,0001 для Wt Astrocytes; p = 0,0004 для // — астроциты).Столбики погрешностей указывают SEM. Звездочками отмечены статистически значимые различия (* p < 0,05, ** p < 0,01).

    Чтобы распространить наши результаты на другие состояния, которые приводят к гибели нейронов, мы также изучили влияние гетерозиготности Nf1 на апоптоз, возникающий в результате эксайтотоксичности (нейроны ЦНС) и окислительного стресса (нейроны ЦНС и ПНС). Используя индуцированную глутаматом эксайтотоксичность, мы обнаружили, что Nf1 +/- нейронов переднего мозга демонстрируют повышенное высвобождение ЛДГ и апоптоз (увеличение на 28% по сравнению с необработанными культурами) по сравнению с их аналогами дикого типа (увеличение на 12% по сравнению с необработанными культурами) (рис.4 А ). Точно так же Nf1 +/- нейроны переднего мозга демонстрируют повышенное высвобождение ЛДГ и апоптоз в ответ на H 2 O 2 -индуцированный окислительный стресс (увеличение на 21% по сравнению с необработанными культурами) по сравнению с нейронами дикого типа (увеличение на 8% по сравнению с необработанными культурами). необработанные культуры) (рис. 4 B ). Однако, напротив, нейронов Nf1 +/- DRG демонстрировали уровни высвобождения ЛДГ и апоптоза, неотличимые от нейронов дикого типа, в ответ на H 2 O 2 -индуцированный окислительный стресс (оба показали увеличение на 30% по сравнению с необработанными культурами). ) (Рис.4 С ). Эти результаты в сочетании с нашим обнаружением того, что Nf1 +/- ЦНС, но не ПНС, нейроны имеют уменьшенную длину нейритов, площади конусов роста и выживаемость, демонстрируют, что гетерозиготность Nf1 придает уязвимость к гибели клеток в ЦНС.

    Рисунок 4.

    Nf1 +/- нейроны переднего мозга имеют повышенную гибель клеток в ответ на эксайтотоксический и окислительный стресс in vitro . A , Nf1 +/- нейроны переднего мозга демонстрируют повышенный выброс ЛДГ (слева; p = 0.001; N = 5) и апоптоз (процент клеток TUNEL+; справа; p = 0,0001; N = 5) после воздействия 50 мкМ глутамата по сравнению с их аналогами WT. B , Nf1 +/- нейроны переднего мозга демонстрируют повышенный выброс ЛДГ (слева; p = 0,05; N = 9) и апоптоз (процент TUNEL+ клеток; справа; p

    61). N = 9) после воздействия 100 мкм H 2 O 2 по сравнению с их аналогами WT. C , Nf1 +/- и WT DRG нейроны демонстрируют сходные уровни высвобождения LDH и процент нейронных клеток TUNEL+ после воздействия 60 мкм H 2 O 2 . Столбики погрешностей указывают SEM. Звездочками отмечены статистически значимые различия (* p < 0,05, ** p < 0,01, *** p < 0,001).

    Уровни цАМФ, а не гиперактивация Ras, ответственны за дисфункцию нейронов, наблюдаемую в

    Nf1 +/- RGCs in vitro

    В то время как предыдущие исследования показали, что Nf1 / — нейроны ПНС демонстрируют повышенную выживаемость клеток в результате нарушения регуляции нейрофибромином Ras, мы показали, что уменьшение длины нейронов ЦНС с дефицитом Nf1 является следствием нейрофиброминового контроля цАМФ. уровни, а не регулирование Ras.Чтобы определить, была ли дерегуляция цАМФ или Ras в первую очередь ответственна за аномалии нейронов, наблюдаемые в Nf1 +/- нейронах ЦНС, мы сначала исследовали активированную митоген-активируемую протеинкиназу (MAPK; фосфо-MAPK) (рис. 5 A ) и Akt (фосфо-Akt) (дополнительный рисунок 2, доступен на www.jneurosci.org в качестве дополнительного материала) экспрессия с помощью двойной маркировки иммунофлуоресценции и не обнаружила различий в активации пути Ras между WT и Nf1 +/- ганглиозный слой сетчатки нейроны in situ .Кроме того, снижение активации MAPK с помощью ингибитора киназы MAP U0126 (MEK) не восстанавливало распространение конуса роста в нейронах Nf1 +/- RGC (рис. 5 B ). Концентрация U0126, использованная в этих экспериментах, была достаточной для снижения, но не устранения активации MAPK в сетчатке (фиг. 5 C ). Точно так же фармакологическое ингибирование активации фосфатидилинозитол-3-киназы (PI3-K; LY294002) в нейронах Nf1 +/- RGC не восстанавливало распространение конуса роста в нейронах Nf1 +/- RGC (рис.6 А ). Наконец, чтобы непосредственно оценить влияние активированного Ras на нейроны RGC, мы использовали линию мышей [мозговой липид-связывающий белок (BLBP)-Cre] для управления конститутивно активным KRas G12D в нейронах (Hegedus et al., 2007, 2009). ). Хотя нейроны из BLBP-Cre; Мыши KRas G12D демонстрируют высокие уровни активности Ras и пути Ras (Hegedus et al., 2007, 2008), нейроны RGC от этих мышей имели области конусов роста, неотличимые от мышей WT (Fig. 6 B ).Вместе эти данные указывают на то, что путь Ras, хотя и важен для Nf1 / — нейронной функции ПНС, не является основной причиной аномалий, наблюдаемых в Nf1 +/- нейронах ЦНС.

    Рисунок 5. Активация пути

    MAPK не отвечает за аномальные фенотипы нейронов Nf1 +/- RGC. A , Не наблюдалось различий в количестве или интенсивности нейронов pMAPK+, NeuN+ Nf1 +/- RGC по сравнению с их аналогами дикого типа (стрелки). B , Обработка ингибитором MEK U0126 (10 мкМ) не восстанавливает Nf1 +/- площади конусов роста нейронов RGC до уровней WT ( N = 24). C , Обработка целых эксплантатов сетчатки U0126 (10 мкм) достаточна для снижения уровней pMAPK. Столбики погрешностей указывают SEM. Звездочками отмечены статистически значимые различия (** p < 0,01).

    Рисунок 6. Гиперактивация пути

    Ras не отвечает за аномальные фенотипы нейронов ЦНС Nf1 +/-. A , Лечение ингибитором PI3-K LY294002 (30 мкм) не восстанавливало областей конусов роста нейронов Nf1 +/- RGC до уровней WT ( p = 0,0001; N = 40). B , Экспрессия конститутивно активного KRas G12D в нейронах не влияла на площадь конуса роста RGC ( N = 40). Столбики погрешностей указывают SEM. Звездочки обозначают статистически значимое различие (** p < 0,01).

    Чтобы определить, может ли цАМФ быть ответственным за аномалии нейронов, наблюдаемые в нейронах Nf1 +/- RGC, мы сначала измерили уровни цАМФ в препаратах цельной сетчатки.Мы обнаружили, что уровни цАМФ были значительно ниже у Nf1 +/- RGC, чем у их аналогов WT ( p = 0,02; N = 8) (рис. 7 A ). Во-вторых, мы восстановили уровни цАМФ, используя два метода: активацию аденилатциклазы (форсколин) (рис. 7 B , дополнительный рис. 1 B , доступный на www.jneurosci.org в качестве дополнительного материала) и ингибирование фосфодиэстеразы-4 (ролипрам). ) (рис. 7 C ). После лечения форсколином или ролипрамом площади конусов роста нейронов Nf1 +/- RGC и длина нейритов были восстановлены до уровней WT.Идентичные эффекты наблюдались с использованием эмбриональных нейронов RGC (дополнительный рисунок 1 C , доступный на www.jneurosci.org в качестве дополнительного материала) и нейронов гиппокампа (дополнительный рисунок 3 A , B , доступный на www.jneurosci. org в качестве дополнительного материала). В-третьих, снижение уровня цАМФ в нейронах WT RGC с использованием DDA (ингибитора аденилатциклазы) приводило к уменьшению площади конусов роста (рис. 7 D ), подобно тому, что мы наблюдали в нейронах Nf1 +/- RGC.

    Рисунок 7.

    Nf1 +/- дефекты роста нейритов и распространения конусов роста зависят от цАМФ. A , уровни цАМФ значительно снижены в препаратах цельной сетчатки Nf1 +/- по сравнению с таковыми из сетчатки WT ( p = 0,02; N = 8). B , Лечение форсколином (10 мкм) восстанавливает длину отростка нейритов Nf1 +/- RGC до уровня дикого типа ( N = 40). Масштабная линейка, 20 мкм. C , Обработка Rolipram (200 мкм) Nf1 +/- RGCs ретинального эксплантата восстанавливает площади конусов роста до уровней WT ( N = 40). D , Ингибирование аденилатциклазы с помощью 100 мкМ DDA снижает площадь конуса роста эксплантата WT RGC до уровней, наблюдаемых в нейронах Nf1 +/- RGC ( N = 40). Столбики погрешностей указывают SEM. Звездочками отмечены статистически значимые различия (* p < 0,05, ** p < 0,01).

    Затем, чтобы связать длину нейритов с апоптозом, мы проанализировали выживаемость клеток после лечения ролипрамом или форсколином. Поскольку количество нейритов ранее коррелировало с выживаемостью клеток (Oshitari et al., 2002), мы исследовали влияние лечения, повышающего уровень цАМФ, на количество нейритов в эксплантате RGC. Как и прежде, рольпрам восстанавливал количество нейритов до уровней WT (рис. 8 ). Затем мы количественно определили количество каспаз-3-иммунореактивных нейронов RGC с одним или несколькими нейритами, чтобы определить, будет ли восстановление уровней цАМФ в Nf1 +/- нейронах RGC увеличивать количество нейронов на ранней стадии процесса запрограммированной гибели клеток. Точно так же лечение ролипрамом или форсколином уменьшало количество каспаз-3-иммунореактивных нейронов RGC с одним или несколькими нейритами до уровней, наблюдаемых в нейронах WT RGC (дополнительная рис.1 D , E , доступно на сайте www.jneurosci.org в качестве дополнительного материала). Наконец, мы напрямую проанализировали апоптоз, используя метод TUNEL. После лечения либо ролипрамом, либо форсколином гибель нейронов RGC снизилась до уровня WT ( p = 0,0001) (фиг. 8 B ). Вместе эти данные показывают, что сниженные уровни цАМФ ответственны за аномальные фенотипы, наблюдаемые в нейронах Nf1 +/- RGC.

    Рисунок 8. Лечение

    Ролипрамом спасает Nf1 +/- RGC смерть in vitro . A , Nf1 +/- нейроны эксплантата сетчатки показывают уменьшенное количество нейритов (нормированное к расстоянию по периметру эксплантата; p = 0,0035). Лечение Rolipram (200 мкм) восстанавливает количество нейритов эксплантата Nf1 +/- до уровней WT. B , Лечение форсколином (10 мкМ) или ролипрамом (200 мкМ) снижает Nf1 +/- апоптоз нейронов эксплантата сетчатки ( p = 0,0001). Столбики погрешностей указывают SEM. Звездочками отмечены статистически значимые различия (* p < 0.05, ** р < 0,01).

    Nf1 гетерозиготность предрасполагает к усилению апоптоза RGC после повреждения зрительного нерва и образования глиомы зрительного нерва in vivo

    Мы выполнили две экспериментальные парадигмы, чтобы изучить влияние гетерозиготности Nf1 на выживаемость нейронов RGC у интактного животного. Во-первых, мы использовали стандартную модель повреждения зрительного нерва, чтобы определить, приводит ли гетерозиготность Nf1 к усилению апоптоза RGC. Через три дня после повреждения зрительного нерва определяли количество апоптотических клеток в ганглиозном слое сетчатки.По сравнению с мышами дикого типа апоптотическая гибель нейронов RGC у мышей Nf1 +/- была увеличена на 15% ( p = 0,01) (фиг. 9 A ).

    Рисунок 9. Апоптоз нейронов

    Nf1 +/- RGC индуцируется разрушением зрительного нерва и образованием глиомы зрительного нерва in vivo . A , Через три дня после повреждения зрительного нерва у мышей Nf1 +/− в слое RGC (белые стрелки) обнаружено большее количество нейронов TUNEL+ (зеленый) и NeuN+ (красный), чем у их собратьев WT ( p = 0.01). B , Повышенный апоптоз нейронов ганглиозного слоя сетчатки, связанный с образованием глиомы зрительного нерва, у мышей Nf1 +/− GFAP CKO (белые стрелки) снижается при лечении ролипрамом in vivo ( p 0, p ). C , Повышенный апоптоз нейронов ганглиозного слоя сетчатки, связанный с повреждением зрительного нерва, через 6 дней после повреждения у мышей Nf1 +/− (белые стрелки) снижается при лечении ролипрамом in vivo ( p = 0.006). Столбики погрешностей указывают SEM. Звездочками отмечены статистически значимые различия (** p < 0,01).

    Во-вторых, мы использовали новую GEM-модель NF1-ассоциированной глиомы зрительного нерва (Bajenaru et al. 2003; Zhu et al. 2005): почти у 100% этих мышей Nf1 +/− экспрессия нейрофибромина в клетках GFAP+ отсутствует ( Nf1 +/- GFAP мышей CKO) к 3-месячному возрасту развиваются глиомы, поражающие прехиазматические зрительные нервы и хиазму. Кроме того, у мышей Nf1 +/- GFAP CKO наблюдается повреждение аксонов ретроорбитального зрительного нерва проксимальнее места образования глиомы и наблюдается гибель RGC (Hegedus et al.2009) (рис. 9 B ). Нейрональный апоптоз RGC не наблюдался у мышей Nf1 +/- или у мышей, лишенных экспрессии Nf1 в клетках GFAP+ (Hegedus et al. 2009).

    Восстановление цАМФ реверсирует

    Nf1 +/- Апоптоз нейронов RGC после образования глиомы зрительного нерва и повреждения зрительного нерва in vivo

    Учитывая повышенную восприимчивость Nf1 +/- RGCs к гибели клеток in vitro и in vivo , мы затем попытались определить, может ли повышение уровня цАМФ у мышей Nf1 +/- GFAP CKO снизить Гибель нейронов RGC в результате глиомы зрительного нерва.После 30 дней лечения ролипрамом, начиная с 2-месячного возраста, апоптоз RGC был значительно ослаблен ( p = 0,0001) (рис. 9 B ). Значимого изменения общего числа клеток не наблюдалось (данные не показаны). Эти результаты показывают, что гибель RGC при глиоме зрительного нерва может быть уменьшена за счет повышения уровня цАМФ 92–175 in vivo 92–176 .

    Чтобы распространить эти результаты на другую парадигму повреждения нейронов, мы лечили мышей Nf1 +/- и WT эфиром 200 мкМ ролипрама или ДМСО (носитель) после повреждения зрительного нерва.Подобно мышам Nf1 +/- GFAP CKO с глиомой зрительного нерва, лечение ролипрамом снижало апоптоз нейронов RGC у мышей Nf1 +/- на 32% по сравнению с контрольной группой, получавшей носитель ( p = 0,006) (фиг. 9 С ). В совокупности эти результаты подтверждают модель, в которой Nf1 +/- нейронов ЦНС восприимчивы к повреждению цАМФ-зависимым образом.

    Обсуждение

    Дети с NF1 имеют аномалии нейронов, которые в первую очередь влияют на ЦНС, включая проблемы с обучением, памятью и поведением, а также дисфункцию зрительного нерва в результате образования глиомы зрительного нерва.Преобладание симптомов в ЦНС у детей с NF1 позволяет предположить, что нейрофибромин является критическим регулятором функции нейронов ЦНС и что нейроны ЦНС могут быть исключительно чувствительными к изменениям в экспрессии генов NF1 . В этом исследовании мы используем комбинацию экспериментальных парадигм in vitro и in vivo , чтобы продемонстрировать, что популяции нейронов ЦНС (нейроны ганглиев гиппокампа и сетчатки), но не нейроны ганглиев дорсальных корешков ПНС, сильно подвержены уменьшению Nf1 экспрессия гена (гетерозиготность Nf1 ).Более того, мы показываем, что избирательная уязвимость нейронов ЦНС к гетерозиготности Nf1 отражает нарушение нейрофиброминовой регуляции уровней цАМФ. Эти результаты подчеркивают существенные различия в клеточных реакциях на дозу гена Nf1 и внутриклеточную передачу сигналов, регулируемую нейрофибромином, и обеспечивают новое механистическое понимание избирательной уязвимости нейронов ЦНС к повреждению.

    В то время как предыдущие исследования показали, что гетерозиготность Nf1 может повышать пролиферацию, подвижность, ангиогенные свойства и дифференцировку многих нервных клеток (Daginakatte and Gutmann, 2007; Kim et al., 1997; Bennett et al., 2003) и ненервных (McDaniel et al., 2008; Ingram et al., 2000; Atit et al., 1999) системных типов клеток сравнительно мало информации о влиянии сниженной экспрессии нейрофибромина на функцию нейронов. . Это особенно актуально для детей и взрослых с NF1, чей мозг состоит из NF1 +/- нейронов. Предыдущие исследования были сосредоточены на нейронах ПНС в качестве модельной системы и не обнаружили влияния гетерозиготности Nf1 на нейроны DRG, нодозных, тройничных или верхних шейных ганглиев (Vogel et al., 1995). Напротив, в отличие от их аналогов нейронов ПНС, мы показываем, что Nf1 +/- нейронов гиппокампа и ретинального ганглия имеют уменьшенную длину нейритов, площади конусов роста и выживаемость. В соответствии с нашими выводами о том, что гетерозиготность Nf1 в нейронах ЦНС приводит к изменению функции нейронов, мыши, гетерозиготные по инактивирующей мутации Nf1 в экспрессирующих синапсин-I нейронах в головном мозге, демонстрируют дефицит обучения и памяти (Cui et al., 2008). .

    В дополнение к различиям, которые мы обнаружили в чувствительности к дозе Nf1 гена, нейроны ЦНС и ПНС демонстрируют диаметрально противоположные ответы на полную инактивацию Nf1 : Nf1 -дефицитные DRG-нейроны выживали в кратковременной культуре без экзогенного NGF, тогда как WT и Nf1 +/- нейронов DRG погибли.Точно так же сенсорные нейроны, выделенные из эмбрионов Nf1 / -, выживали и расширяли нейриты в отсутствие нейротрофинов, тогда как нейроны дикого типа или Nf1 +/- быстро погибали, если не вводили NGF или BDNF in vitro ( Фогель и др., 1995, 2000). Кроме того, Nf1 / — нейронов у мышей с условным нокаутом Nf1 имеют повышенный рост нейритов и коллатеральное ветвление после травмы задних корешков in vivo (Romero et al., 2007). Более того, в настоящем исследовании мы показали, что апоптоз нейронов DRG, вызванный окислительным стрессом, был эквивалентно увеличен в нейронах Nf1 +/- и WT. В отличие от этих результатов в нейронах ПНС, мы продемонстрировали в этом отчете, что Nf1 +/- нейроны ганглия гиппокампа и сетчатки уменьшают расширение нейритов, площади конусов роста и выживаемость в ответ на несколько различных условий повреждения in vitro ( окислительный и эксайтотоксический стресс) и in vivo (образование глиомы зрительного нерва и размозжение зрительного нерва).Эти новые наблюдения согласуются с нашими более ранними выводами о том, что Nf1 -дефицитные нейроны, дифференцированные из нейральных стволовых клеток, имеют более короткие нейриты, чем их аналоги дикого типа in vitro и in vivo (Hegedus et al., 2007).

    Предыдущие исследования показали, что удлинение и выживание нейритов ПНС регулируются сигнальным путем Ras (Vogel et al., 2000; Aletsee et al., 2001). Нейрофибромин действует во многих типах клеток как негативный регулятор активности Ras (Basu et al., 1992; ДеКлю и др., 1992; Боллаг и др., 1996; Хиатт и др., 2001; Дасгупта и др., 2005; Xu et al., 2007): инактивация Nf1 приводит к повышению активности Ras и нарушению регуляции передачи сигналов через Ras-опосредованные эффекторные белки Akt и MAPK. В этом отношении повышенное удлинение нейритов и выживаемость, наблюдаемые в Nf1 -/- нейронах ПНС, можно было обратить вспять с помощью нейтрализующих Ras-антител (Vogel et al., 2000), что согласуется с более ранними сообщениями, демонстрирующими, что BDNF-индуцированный узловой ганглий и NGF-индуцированный Выживание нейронов DRG блокируется Ras-нейтрализующими антителами (Borasio et al., 1993). Дальнейшее исследование ответственных эффекторных путей Ras выявило, что активация PI3-K, а не ERK, необходима для NGF-индуцированного выживания эмбриональных сенсорных нейронов (Klesse and Parada, 1998). Сходная зависимость от активации PI3-K также наблюдалась в нейронах DRG мышей, так что ингибирование с помощью LY294002 блокировало нормальную морфологию конусов роста аксонов, рост нейритов и выживание (Edström and Ekström, 2003).

    В нейронах ЦНС мы не обнаружили повышенной активации Akt в Nf1 +/- нейронах RGC и не обнаружили влияния ингибирования MEK или PI3-K на рост или выживание нейритов RGC.Точно так же нейроны RGC, экспрессирующие активированный аллель KRas, имели нормальные площади конусов роста. Эти результаты согласуются с предыдущими отчетами, демонстрирующими, что хотя потеря Nf1 в нейронах головного мозга связана с повышенной активацией MAPK in vivo (Zhu et al., 2001; Hegedus et al., 2007), гиперактивация пути Ras не ответственна за уменьшенная длина нейритов наблюдается в Nf1 -/- нейронах. В предыдущем исследовании мы продемонстрировали, что экспрессия активированного аллеля KRas (KRas G12D ) или Akt (myr-Akt1) не влияла на длину нейритов in vitro или in vivo (Hegedus et al., 2007). Наоборот, уменьшение длины нейритов, наблюдаемое in vitro и in vivo , было обращено вспять агентами, повышающими внутриклеточный уровень цАМФ (форсколин, ролипрам), что согласуется с ролью нейрофибромина как положительного регулятора цАМФ в головном мозге (Tong et al. ., 2002; Дасгупта и др., 2003). Кроме того, замена нейрофиброминового домена Ras-GAP у мышей с мутацией Nf1 приводила к восстановлению уровня активности МАРК, но не влияла на дисфункцию нейронов гипоталамуса, наблюдаемую у этих мышей (Hegedus et al., 2008). В совокупности эти данные подтверждают наши текущие наблюдения в Nf1 +/- RGC и нейронах гиппокампа, что нейрофибромин регулирует длину нейритов ЦНС цАМФ-зависимым образом.

    В отличие от наших результатов, демонстрирующих, что цАМФ отвечает за аномальную функцию нейронов ЦНС, предыдущее исследование показало, что лечение ингибитором 3-гидрокси-3-метилглутарил-коэнзима А (ГМГ-КоА) редуктазы корректировало дефицит обучения и долгосрочные нарушения потенциации. у мышей Nf1 +/- (Li et al., 2005). Однако ингибиторы HMG-CoA-редуктазы влияют на вторичные модификации липидов на многих других белках, помимо Ras. Хотя одной мишенью изопренилирования являются мономерные G-белки (например, Ras), изопренилированию могут подвергаться и гетеротримерные G-белки. В связи с этим аторвастатин может модулировать β-адренергическую выработку цАМФ и передачу сигналов путем изопренилирования γ-субъединиц G-белка (Mühlhäuser et al., 2006). В соответствии с этими выводами было показано, что ловастатин ингибирует стимулированную цАМФ секрецию хлоридов (Ecay and Valentich, 1993) и экспрессию генов пролактина/гормона роста посредством цАМФ-зависимого механизма (Lasa et al., 1997). Точно так же симвастатин увеличивает уровни цАМФ дозозависимым образом, что может быть устранено с помощью метаболита мевалоната геранилгеранилпирофосфата или ингибитора протеинкиназы А Н-89 (Maeda and Horiuchi 2009). Наконец, atorvastatin и simvastatin могут индуцировать гибель гранулярных клеток мозжечка, не влияя на передачу сигналов Akt или MAPK (März et al., 2007). В свете этих предыдущих результатов и наших текущих результатов возможно, что наблюдаемый эффект ловастатина на обучение и память Nf1 +/- мышей отражает модуляцию уровней цАМФ, а не активность Ras в нейронах ЦНС.

    Одним из клинически важных следствий настоящего отчета является способность значительно ослаблять смерть нейронов Nf1 +/- RGC, связанную с образованием глиомы зрительного нерва и повреждением зрительного нерва при раздавливании с помощью ролипрама. Чувствительность нейронов ГКС к цАМФ подчеркивается многочисленными предыдущими исследованиями: гибель нейронов ГКС, вызванная тетрадотоксином, может быть обращена вспять повышением уровня цАМФ in vitro (Kaiser and Lipton 1990), в то время как выживание нейронов ГКС и регенерация аксонов после аксотомии или зрительного нерва раздавливание может быть увеличено введением негидролизуемых аналогов цАМФ (Cui et al., 2003; Монсул и др., 2004). Наше открытие о том, что выживаемость нейронов Nf1 +/- RGC отражает нарушение регуляции передачи сигналов цАМФ, интригует в свете предыдущих исследований нашей лаборатории, показывающих, что потеря Nf1 в астроцитах приводит к несоответствующей выживаемости клеток вследствие нарушения выработки цАМФ (Warrington et al. ., 2007). В отличие от нейронов, повышенные уровни цАМФ связаны со снижением выживаемости астроцитов (Dugan et al., 1999; Warrington et al., 2007). После лечения ролипрамом или форсколином Nf1 -/- выживаемость астроцитов снижается до уровней дикого типа in vitro .Кроме того, лечение ролипрамом in vivo аналогичным образом приводит к снижению пролиферации глиомы зрительного нерва (N. Warrington, S. Gianino, D. H. Gutmann и J. B. Rubin, неопубликованные наблюдения). Наблюдение за тем, что препараты, повышающие уровень цАМФ, не только уменьшают рост глиомы зрительного нерва, но и ослабляют апоптоз нейронов RGC, повышает вероятность того, что эта терапевтическая стратегия может иметь как противораковые, так и нейропротекторные эффекты при лечении детей с глиомой зрительного нерва, связанной с NF1.

    DVIDS — Новости — Почему сегодняшнее «поколение Z» рискует получить травмы в учебном лагере

    Примечание редактора: это первая статья в серии статей о подготовке новобранцев и стажеров, а также о том, как Военная система здравоохранения поддерживает военные службы в поддержании оптимального здоровья, поскольку эти молодые мужчины и женщины проходят базовую подготовку, вербуются и поступают в армию.

    Нынешнему поколению 18-25-летних не так просто пройти обучение новобранцев и успешно перейти от гражданской жизни к военной.

    Нынешние рекруты ведут гораздо более сидячий образ жизни по сравнению с предыдущими поколениями, что делает их скелеты более уязвимыми, потому что они не привыкли к той интенсивной деятельности, с которой им придется столкнуться во время базовой подготовки.

    Несколько недель преднамеренной физической подготовки перед отправкой в ​​учебный лагерь или базовую подготовку могут значительно увеличить шансы новобранца на успех за счет предотвращения наиболее распространенных травм, которые могут задержать или сорвать завершение начальной военной подготовки новобранца.

    «Мы видим травмы, начиная от острых переломов и падений, до разрывов передней крестообразной связки, растяжений мышц и стрессовых переломов, при этом подавляющее большинство травм связано с чрезмерным использованием», — сказала капитан армии Лидия Блондин, помощник начальника отдела физиотерапии в больнице. Армейский общественный госпиталь генерала Леонарда Вуда в Форт-Леонард-Вуд.

    По ее словам, это происходит в основном на нижних конечностях. По статистике, женщины, как правило, имеют более высокий уровень травматизма, чем их коллеги-мужчины, добавила она.

    Что могут сделать новобранцы перед началом обучения?

    Чтобы подготовиться к базовому обучению, новобранцы должны «встать с дивана», сказал майор армии Джон-Марк Тибодо, клинический координатор и начальник службы медицинской готовности в Форт Леонард Вуд. Подготовка может включать:

    • Начните программу тренировок с упражнениями с отягощениями, такими как бег, ходьба и некоторые силовые тренировки.
    • Рассмотрите онлайн-программу прогрессии бега «От дивана до 5 км» или что-то подобное, чтобы помочь постепенно влиться в суровость базовых тренировок, особенно если вы никогда не занимались спортом в старшей школе или если вы старше и не занимались спортом. был очень активен в течение нескольких лет, так как это значительно повышает вероятность получения травмы на тренировке.
    • Поговорите со своим рекрутером о любых возможностях обучения.
    • Убедитесь, что вы находитесь на солнце и регулярно выпиваете немного молока. Блонден сказал, что они обычно наблюдают низкий уровень кальция и витамина D, особенно при стрессовых травмах костей
    . • Следите за своим питанием. В целом, питание является важным фактором здоровья костей и мышц и может значительно повлиять на риск травм и восстановление.

    Для получения дополнительной информации для подготовки к базовому обучению, ознакомьтесь с этим блогом от Human Performance Resources CHAMP — Консорциума по вопросам здравоохранения и военной эффективности Университета медицинских наук для вооруженных сил в Бетесде, штат Мэриленд.

    Эта статья была изменена по сравнению с исходной версией.

    Быть родителем кемпера в третьем поколении

    Сара Шапиро-Плеван

    Я плакала, когда отвозила сына в лагерь. Как ни странно, это было не потому, что я буду скучать по нему, и не потому, что я думала, что он может скучать по мне, или даже потому, что мы только что провели последние 16 месяцев вместе. Я плакала от благодарности за лагерь моего ребенка, потому что они сделали все, что в их силах, чтобы дать ему возможность провести это драгоценное время со своими друзьями и вернуть некое подобие юности, которое он пропустил за последний год.

    У него есть лето, которое ему нужно, чтобы он мог продолжать становиться тем, кем он становится. Он любитель лагеря. Его самое заветное место находится где-то посреди мигрирующих /полей на стороне Б, в Кэмп-Рама в Новой Англии, на 01069.

    Когда я вижу, как мой ребенок бежит навстречу своим друзьям с ликованием и легкой грустью, это большая победа. Я возьму слезы, и каждый тест на COVID, и маску, и набор инструкций и мер предосторожности. Я принимаю эти слезы, потому что они представляют собой смесь знания о том, что он представитель третьего поколения моей семьи, проводящего лето в лагере, нытья о еде и признания того, что да, он действительно читал Tisha B’Av и, возможно, даже наслаждался этим.Нет лонгитюдных исследований семей, которые на протяжении нескольких поколений выбирали для записи своих детей в еврейский летний лагерь. Есть так много вещей, которые нужно изучить о ценности этого опыта, поскольку он передается от родителей к детям и даже внукам — как решения о выборе летнего лагеря коренятся в нашем собственном опыте кемпинга (хорошем и плохом) и как это влияет на то, как наши дети оценивают свое время в лагере и на их ощущение себя евреями. Давайте собирать эти истории не только для того, чтобы мы могли вспомнить лагерные сказки наших родителей, но и для того, чтобы мы могли отпраздновать свои собственные и поделиться ими с нашими детьми.

    В этом году, более чем когда-либо, мы пришли к пониманию того, что самое ценное в лагере — это «пузырь». В предыдущие годы это относилось к пузырю, в котором члены общины всех возрастов совместно создают идеализированную еврейскую жизнь — сценарий, который трудно, если вообще возможно, воспроизвести за пределами лагеря, как бы мы ни старались. В этом году мы по-другому оцениваем «пузырь», который защищает наших детей от COVID, помогает им восстановить чувство общности, возобновить свою приверженность дружбе и обновить свою идентичность вдали от своих семей.Именно в этом священном пространстве они находятся в полной безопасности, когда выходят из пандемического года, который не был похож ни на один другой. Если когда-то и было время инвестировать в лагерь и убедиться, что эти пузыри могут удержать наших детей, то это сейчас.

    Люди моего сына — его лагерные друзья. У меня появилась настоящая привязанность к их родителям, и я благодарен им за воспитание заботливых, вдумчивых и добрых молодых людей. Так случилось, что я чувствую то же самое и по отношению к своим людям, так как многие из моих самых близких друзей — это люди, которых я встретил на протяжении многих лет в том же лагере.Когда мы можем поделиться опытом и сделать выбор, по крайней мере, в этом священном пространстве, мы знаем, что где-то разделяем некоторые основные ценности. Все, что я желаю своему ребенку, — это долгие годы глубоких, прочных отношений, которые вырастают из его лет в лагере в течение 9 лет (-1 за COVID). И когда я пойду за ним, я расплачусь в последний раз, потому что это будет его последнее лето в качестве туриста и мой последний раз, когда я буду заниматься пикапом… пока он не станет вожатым.

    Leave a Reply

    Ваш адрес email не будет опубликован.